ドットブロット（またはスロットブロット）は、分子生物学においてタンパク質を検出するために使用される手法です。ウェスタンブロット法を簡略化したもので、検出対象となるタンパク質を電気泳動で分離する必要がない点が異なります。代わりに、サンプルを膜上の単一のスポットに直接塗布し、ブロッティング操作を行います。
この技術は、クロマトグラフィーやゲル電気泳動のように時間を大幅に節約でき、ゲルの複雑なブロッティング手順も不要です。しかし、標的タンパク質のサイズに関する情報は得られません。[1]
用途
ドットブロット法はウェスタンブロット法と原理的には似ていますが、スピードが速く、コストが低いという利点があります。[2]ドットブロット法は抗体の結合能力をスクリーニングするためにも行われます。[3]
方法論
一般的なドットブロット法では、ニトロセルロース膜またはPVDF膜に1～2マイクロリットルのサンプルをスポットし、自然乾燥させます。サンプルは、組織培養上清、血清、細胞抽出物、またはその他の調製物とすることができます。[4]タンパク質サンプルを膜にスポットした後、膜をプラスチック容器に入れ、ブロッキングバッファー、抗体溶液、またはリンスバッファー中で振盪しながら順次インキュベートします。抗体が結合した後、膜を化学発光基質とインキュベートし、画像化します。
真空アシストドットブロット装置は、真空を利用して膜下層から溶液を抽出することで、リンスおよびインキュベーション工程を容易にするために用いられてきました。膜は複数層のプレートの間に設置されており、サンプルウェル間の良好な密閉性、廃液の保持、そして吸引力の確保を実現しています。化学発光シグナルの検出には、装置を分解し、膜を取り出して透明なプラスチックフィルムで包む必要があります。
参照
参考文献
- ^ 「ウェスタンブロット：テストブロット、スロットブロット、ドットブロット」Bio-Rad . 2024年8月8日閲覧。
- ^ Cheng, Li-Ting; Zeng, Yu-Jing; Chu, Chun-Yen; Wang, Hsian-Yu (2019年12月). 「牛流行熱ウイルスの力価測定のための迅速ドットブロットアッセイの開発」. BMC Veterinary Research . 15 (1): 313. doi : 10.1186/s12917-019-2059-6 . PMC 6720828. PMID 31477093 .
- ^ Rupprecht, Kevin R.; Nair, Rad K.; Harwick, Larissa C.; Grote, Jonathan; Beligere, Gangamani S.; Rege, Sushil D.; Chen, Yon-Yih; Lin, Zhen; Fishpaugh, Jeffrey R. (2010年12月15日). 「低分子量薬物に対するモノクローナル抗体のスクリーニングのためのドットブロットアッセイの開発」. Analytical Biochemistry . 407 (2): 160– 164. doi :10.1016/j.ab.2010.08.003. PMID 20696124.
- ^ 「ドットブロットプロトコル」abcam . 2023年5月21日. 2024年8月8日閲覧。
