アレクサンダー・ダウンス[1] [2]によって発明され、その名にちなんで名付けられた ダウンス型ホモジナイザー（または「ダウサー」）は、一端が閉じられた円筒形のガラス管で、外径が厳密に定められた2本のガラス製乳棒が取り付けられており、真核細胞（例えば哺乳類細胞）を穏やかにホモジナイズするために使用されます。ダウンス型ホモジナイザーは、今日でも細胞小器官の分離に広く使用されています。
ダウンス型ホモジナイザーの2種類の乳棒（「ルーズ」または「A」乳棒と「タイト」または「B」乳棒として知られています）は、シリンダーの内径に対して厳密に指定された外径を持っています。「A」（ルーズ）乳棒はシリンダー壁からのクリアランスが（約0.0025～0.0055インチ）で、「B」（タイト）乳棒は（約0.0005～0.0025インチ）です。[3]これにより、組織や細胞はせん断応力によって溶解され、加熱は最小限（または全く）で済みます。その結果、抽出された細胞小器官や熱に弱い酵素複合体はほぼ無傷のまま残ります。
通常、軟組織（例えば哺乳類の肝臓）を細かく切断または砕き、適切な量の溶解緩衝液とともにガラスシリンダーに入れます。均質化は、乳棒をシリンダー内を上下に、最初に緩い乳棒で、次に締め付けた乳棒で規定回数「通過」させることで行われます。[4]通常は5～10回の通過です。ダウンス型ホモジナイザーは通常、ホウケイ酸ガラスで作られていますが、それでも壊れやすいため、注意して使用する必要があります。特に硬い組織や硬い組織は、ダウンス型ホモジナイザーで使用する前に事前に均質化する必要があります。
Saccharomyces cerevisiaeなどの強固な細胞壁を持つ真核細胞は、細胞壁を最初に分解しない限り (例えば、リチカーゼ、またはS. cerevisiaeの場合はザイモリアーゼを使用して)、ダウンスホモジナイザーで直接溶解することはできません。
参考文献
- ^ Dounce, AL ; Monty, KJ; Pate, S. (1954). 「改良法による単離細胞核のゲル形成」FASEB J. 13 : 201. ISSN 0014-9446.
- ^ Dounce, AL (1955). 「同一ホモジネートから無傷のミトコンドリアと核を分離する方法、およびミトコンドリア破壊が細胞核の特性に及ぼす影響」. The Journal of Cell Biology . 1 (2): 139– 153. doi :10.1083/jcb.1.2.139. ISSN 0021-9525. PMC 2223770. PMID 14381436 .
- ^ 「アーカイブコピー」（PDF） 。 2019年1月8日時点のオリジナル（PDF）からアーカイブ。 2019年1月8日閲覧。
{{cite web}}: CS1 maint: archived copy as title (link) - ^ Dennison, C. (2013). タンパク質単離ガイド. 構造生物学に焦点を当てる. Springer Netherlands. p. 42. ISBN 978-94-017-0269-0. 2019年1月8日閲覧。
