リポフェクタミンまたはリポフェクタミン2000は、インビトロジェン社が製造・販売する分子生物学・細胞生物学で使用される一般的なトランスフェクション 試薬です。[1]これは、リポフェクションによってRNA（mRNAおよびsiRNAを含む）またはプラスミドDNAをin vitro細胞培養物に導入する効率を高めるために使用されます。[1]リポフェクタミンには、水性環境でリポソームを形成できる脂質サブユニットが含まれており、DNAプラスミドなどのトランスフェクションペイロードを捕捉します。
リポフェクタミンは、DOSPA（2,3-ジオレオイルオキシ-N-[2(スペルミンカルボキサミド)エチル]-N,N-ジメチル-1-プロパニミニウムトリフルオロ酢酸）とDOPEの3:1混合物から構成され、[2]負に帯電した核酸分子と複合体を形成し、細胞膜の静電反発を克服できるようにします。[3]リポフェクタミンのカチオン性脂質分子は、中性共脂質（ヘルパー脂質）とともに配合されます。[3] DNAを含むリポソーム（表面が正に帯電）は、中性共脂質がリポソームと細胞膜の融合を媒介するため、生細胞の負に帯電した細胞膜と融合することができ、その結果、核酸カーゴ分子が複製または発現のために細胞質に入ることが可能になります。[3]
細胞がトランスジェニック遺伝子を発現するには、核酸が細胞の核に到達して転写を開始する必要があります。しかし、トランスフェクトされた遺伝物質はそもそも核に到達せず、輸送過程のどこかで破壊される可能性があります。[3]分裂細胞では、この物質は有糸分裂後に再構築中の核膜に捕捉されて核に到達する可能性があります。[3]しかし、分裂していない細胞においても、リポフェクタミンはトランスフェクションの効率を向上させることが研究で示されており、これはトランスフェクトされた遺伝物質が無傷の核膜を通過するのをさらに助けることを示唆しています。[3]
このトランスフェクション法は、Yongliang Chu博士によって発明されました。[4]
参照
参考文献
- ^ Invitrogen (2012). 「リポフェクタミン2000試薬」
- ^ Yang, J., Huang, L. 血清抵抗性のためのカチオン性リポソーム-DNA複合体の時間依存的成熟. Gene Ther 5, 380–387 (1998). https://doi.org/10.1038/sj.gt.3300596
- ^ abcdef Dalby B, Cates S, Harris A, Ohki EC, Tilkins ML, Price PJ, Ciccarone VC (2004年6月). 「Lipofectamine 2000試薬を用いた高度なトランスフェクション：初代培養ニューロン、siRNA、およびハイスループットアプリケーション」. Methods . 33 (2): 95– 103. doi :10.1016/j.ymeth.2003.11.023. PMID 15121163.
- ^ 米国出願US7479573B2、Yongliang Chu、Malouk Masoud、Gulliat Gebeyehu、「トランスフェクション試薬」、Life Technologies CorpおよびInvitrogen Groupに譲渡
米国特許US7479573B2、Yongliang Chu、Malek Masoud & Gulliat Gebeyehu、「トランスフェクション試薬」、Life Technologies CorpおよびInvitrogen Groupに譲渡
