金コロイドタンパク質アッセイ

コロイド金タンパク質アッセイは、溶液中のタンパク質の総濃度（約0.1 ng/μLから200 ng/μL）を測定するための高感度生化学アッセイです。 [ 1 ]これは、市販の「Aurodye」コロイド金溶液を使用した2つのグループによって1987年に初めて説明されました。[ 2 ] [ 3 ]注目すべきことに、Aurodyeの処方は1987年から1990年の間に変更され、タンパク質アッセイに適合しなくなりましたが、[ 4 ] Bio -Rad [ 5 ]やDiversified Biotech [ 4 ]などのベンダーは、タンパク質アッセイに適したコロイド金製剤の提供を開始しました。これらの製品はその後製造中止となり、現在このアッセイ用のコロイド状金を明示的に販売しているベンダーはありませんが、このアッセイに適した約17-40 nmの金ナノ粒子を製造するための詳細な合成手順が公開されており、コロイド状金の保存安定性を高め、アッセイをマイクロプレート形式に適応させ、感度を高めるための変更も行われています。[ 6 ]このアッセイに適合すると思われる約17-40 nmのサイズ範囲の金ナノ粒子は現在市販されています。[ 7 ]

機構

総タンパク質濃度は565 nmでの吸光度の増加によって読み取られ、マイクロプレートリーダーなどの比色分析法を用いて測定することができます。チオールとSDSを除くほとんどの一般的な試薬がこのアッセイに適合します。[ 1 ]マイクロプレートフォーマットでの感度を最大化するために最適化されたアッセイ処方が記載されています。[ 6 ]

他のアッセイとの比較

コロイド金アッセイは最も感度の高い溶液中比色タンパク質アッセイですが、CBQCA、 FQ、NanoOrange、Quant-iT、EZQアッセイなどの蛍光タンパク質アッセイも同等かそれ以上の感度を持つ可能性があります。[ 8 ]

参照

参考文献

  1. ^ a b Ahmed, Hafiz (2005).タンパク質抽出、精製、および特性評価の原理と反応. CRC Press. p. 58. doi : 10.1201/9780203507438 . ISBN 978-0-203-50743-8。
  2. ^ Stoscheck, Christa M. (1987). 「ナノグラムレベルで高感度なタンパク質アッセイ」.分析生化学. 160 (2). Elsevier BV: 301– 305. doi : 10.1016/0003-2697(87)90051-0 . ISSN 0003-2697 . 
  3. ^ Hunter, John B.; Hunter, Susan M. (1987). 「コロイド金染色剤AuroDyeを用いた低ナノグラム範囲のタンパク質の定量」.分析生化学. 164 (2). Elsevier BV: 430– 433. doi : 10.1016/0003-2697(87)90515-x . ISSN 0003-2697 . 
  4. ^ a b Deutscher, MP (1990).タンパク質精製ガイド. 酵素学の方法. アカデミックプレス. p. 64. ISBN 978-0-12-182083-1. 2023年4月9日閲覧。
  5. ^ Rad, Bio-. 「Enhanced Colloidal Gold Total Protein Detection Kit - Instruction Manual」（PDF） . Bulletin_9238.pdf . Bio-Rad . 2023年4月9日閲覧。
  6. ^ a b Ciesiolka, Thomas; Gabius, Hans-Joachim (1988). 「コロイド状金の改良適用によるタンパク質定量感度の8～10倍向上」.分析生化学. 168 (2). Elsevier BV: 280– 283. doi : 10.1016/0003-2697(88)90319-3 . ISSN 0003-2697 . 
  7. ^ 「球状金ナノ粒子」 . Nanopartz . 2023年4月9日閲覧。
  8. ^ Burgess, RR; Deutscher, MP (2009).タンパク質精製ガイド. ISSN. Elsevier Science. p. 80. ISBN 978-0-08-092317-8. 2023年4月9日閲覧。
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