顕微鏡スライド
顕微鏡スライドは、通常75mm×26mm（3×1インチ）、厚さ約1mmの薄い平らなガラス板で、顕微鏡で観察する対象物を保持するために用いられます。通常、対象物はスライド上に固定され、その後、スライドとスライドを一緒に顕微鏡に挿入して観察します。この構造により、スライドに取り付けられた複数の対象物を顕微鏡に素早く出し入れしたり、ラベルを貼ったり、運搬したり、適切なスライドケースやフォルダーなどに保管したりすることが可能になります。
顕微鏡スライドは、しばしばカバーガラス（標本を覆う、より小さく薄いガラス板）と一緒に使用されます。スライドは、スライドクリップ、スライドクランプ、またはクロステーブルによって顕微鏡のステージ上に固定されます。クロステーブルは、顕微鏡のステージ上でスライドを正確に遠隔操作するために使用されます（自動操作やコンピュータ操作のシステム、あるいは汚染の危険性や精度不足のために指でスライドに触れることが不適切な場合など）。
歴史
この概念の起源は、透明な雲母の円板の間に標本を挟んだ象牙や骨の破片で、ステージと対物レンズの隙間に滑り込ませるというものでした。 [ 1 ]これらの「スライダー」は、王立顕微鏡協会が標準化されたガラス製顕微鏡スライドを導入するまで、ビクトリア朝時代のイギリスで人気がありました。[ 2 ]
寸法と種類
標準的な顕微鏡スライドは約75mm×25mm（3インチ×1インチ）で、厚さは約1mmです。様々な用途に合わせて、地質学用の75×50mm、岩石学研究用の46×27mm 、薄片用の48×28mmなど、様々なサイズが用意されています。スライドは通常、一般的なガラスで作られ、縁は細かく研磨されていることが多いです。
顕微鏡のスライドは通常、ソーダ石灰ガラスやホウケイ酸ガラスなどの光学ガラスで作られていますが、特殊なプラスチックも使用されます。溶融石英製のスライドは、蛍光顕微鏡など紫外線透過性が重要な場合によく使用されます。[ 3 ] [ 4 ]
プレーンスライドが最も一般的ですが、いくつかの特殊なタイプがあります。コンキャビティスライドまたはキャビティスライドには、1つまたは複数の浅い窪み（「ウェル」）があり、やや厚みのある物体や、液体や組織培養などの特定のサンプルを保持するために設計されています。[ 5 ] スライドには、安全性や堅牢性を高めるために丸みを帯びた角がある場合や、スライドクランプやクロステーブルで使用するために角がカットオフされている場合があります。この場合、スライドはバネ仕掛けの湾曲したアームで固定され、一方の角に接触することで、スライドの反対側の角が動かない直角アームに押し付けられます。このシステムを、これらのカットオフコーナーが組み込まれていないスライドで使用すると、角が欠けてスライドが破損する可能性があります。[ 5 ]
格子線スライドには、拡大鏡で観察される物体の大きさを容易に推定できるように、また微小物体を数えるための基準領域として利用できるように、格子線（例えば1 mmの格子）が刻まれている。格子線の一つの正方形自体が、より細かい格子に分割されている場合もある。細胞計数用の血球計数器などの特殊用途のスライドでは、上面に様々なリザーバー、チャネル、バリアがエッチングまたは研磨されていることがある。 [ 6 ]製造業者は、通常PTFEなどの不活性材料を用いて、様々な恒久的なマーキングやマスクを表面に印刷、サンドブラスト、または蒸着する ことがある。[ 7 ]
- 細胞カウント用のノイバウアースライド。
- 細胞を数えるのに使用されているノイバウアースライドの目盛りの顕微鏡画像。
- クロステーブル上のスライドクランプによって顕微鏡スタンドに固定された Neubauer スライド。
- 標準 (75 x 25 mm または 3x1 インチ) および大型 (75 x 51 mm または 3x2 インチ) の顕微鏡スライド。
一部のスライドには、鉛筆やペンでラベルを記入するための、片方の端に艶消しまたはエナメルコーティングが施された部分があります。 [ 5 ]スライドには、化学的不活性や細胞接着の強化などのために、製造元によって特殊なコーティングが施されている場合があります。コーティングには永久電荷が付与されており、薄いサンプルや粉末状のサンプルを保持できます。一般的なコーティングとしては、ポリ-L-リジン、シラン、エポキシ樹脂、[ 5 ] [ 7 ]、さらには金などが挙げられます。[ 8 ]
取り付け
顕微鏡スライドへの標本の固定は、観察を成功させる上で非常に重要となることがよくあります。この問題は過去2世紀にわたって大きな注目を集め、多くの専門的で時には非常に高度な技術が駆使される、高度に発達した分野です。標本は、多くの場合、より小さなガラスカバースリップを用いて固定されます。
カバーガラスの主な機能は、固体試料を平らに押さえ、液体試料を均一な厚さの平らな層に成形することです。これは、高解像度顕微鏡の焦点 領域が非常に狭いため、不可欠です。
カバーガラスには、他にもいくつかの機能があります。標本を（カバーガラスの重さ、または湿式封入の場合は表面張力によって）所定の位置に保持し、埃や偶発的な接触から標本を保護します。顕微鏡の対物レンズが標本に接触するのを防ぎ、またその逆も同様です。油浸顕微鏡法や水浸顕微鏡法では、カバーガラスが浸漬液と標本の接触を防ぎます。カバーガラスはスライドに接着して標本を密封し、標本の脱水や酸化を遅らせ、汚染を防ぎます。標本の種類に応じて、市販のシーラント、実験用製剤、あるいは一般的な透明マニキュアなど、様々なシーラントが使用されています。生細胞標本に使用できる無溶剤シーラントは、「ヴァラップ」です。これは、ワセリン、ラノリン、パラフィンを同量ずつ混合したものです。 [ 9 ]微生物や細胞の培養は、スライド上に置く前にカバーガラス上で直接行うことができ、標本はスライド上ではなくカバーガラス上に永久的に固定することもできる。[ 9 ]
カバーガラスには様々なサイズと厚さのものがあります。[ 10 ]厚さが適切でないと、球面収差が発生し、解像度と画像強度が低下する可能性があります。特殊な対物レンズを使用すれば、カバーガラスなしで標本を観察できます。また、補正環を備えているものもあり、これにより、異なる厚さのカバーガラスにも対応できます。[ 11 ] [ 12 ]
ドライマウント
ドライマウントは最もシンプルなマウント方法で、対象物をスライド上に置くだけです。標本と顕微鏡の対物レンズを保護し、標本を静止させて平らに保つために、カバーガラスを上に載せることもあります。このマウントは、花粉、羽毛、毛髪などの標本の観察に適しています。また、透明メンブレンフィルターに捕捉された粒子の観察（例えば、大気中の塵埃の分析）にも用いられます。
ウェットマウントまたは仮マウント
ウェットマウントでは、標本をヨウ素などの液体の滴に浸し、表面張力によってスライドとカバーガラスの間に挟みます。この方法は、例えば池の水やその他の液体媒体、特に湖沼で生育する微生物の観察によく用いられます。
準備マウントまたは永久マウント
病理学や生物学の研究のために、標本は通常、腐敗を防ぐために標本を固定し、含まれる水分を除去し、水をパラフィンに置き換え、ミクロトームを使用して標本を非常に薄い切片に切断し、切片を顕微鏡のスライド上に配置し、特定の組織成分を明らかにするためにさまざまな染料を使用して組織を染色し、組織を透明にするために洗浄し、カバーガラスと封入剤で覆うという複雑な組織学的準備を受けます。
散らばったマウント
散布標本作製法とは、濃縮サンプルを蒸留水に懸濁し、スライド上に載せて水を蒸発させることで花粉学顕微鏡スライドを作成する方法である。[ 13 ]
封入剤
封入剤は、標本を包埋する溶液であり、通常はカバーガラスの下に敷かれる。水やグリセロールなどの単純な液体も封入剤とみなされるが、一般的には硬化して永久的な封入物となる化合物を指す。一般的な封入剤には、パーマウント[ 14 ]、ホイヤーの封入剤、代替のグリセリンクレリー[ 15 ]など がある。優れた封入剤の特性としては、屈折率がガラス（1.518）に近いこと、標本と反応しないこと、経時的に結晶化、暗色化、屈折率の変化がなく安定していること、標本を調製した媒体（水性またはキシレンやトルエンなどの非極性）に溶解すること、標本の染色が褪色したり浸出したりしないことなどがあげられる。[ 16 ]
封入剤の例
水性
蛍光を保管できない場合の免疫蛍光細胞化学で広く用いられます。一時的な保管は暗くて湿潤なチャンバー内で行う必要があります。一般的な例は以下の通りです。
- グリセロール-PBS（9:1）とアンティークンチ、例えば以下のいずれか[ 17 ]
- p-フェニレンジアミン
- 没食子酸プロピル
- 1,4-ジアザビシクロ (2,2,2)-オクタン (DABCO) (非常に人気)
- アスコルビン酸
- モウィオールまたはゲルバトール
- ゼラチン
- マウント
- ベクターシールド
- ゴールドを延長
- CyGEL / CyGEL Sustain（生きた、固定されていない細胞や生物を固定化します）
非水性
永久マウントが必要な場合に使用します
- パーマウント（トルエンおよびα-ピネン、β-ピネン、ジペンテン、β-フェランドレンのポリマー）
- カナダバルサム
- DPX（ディストレネ80 – 市販のポリスチレン、可塑剤、例：ジブチルフタレート、キシレン）
- DPX新製品（キシレンを含みますが、発がん性物質であるフタル酸ジブチルは含まれていません）
- エンテラン（トルエン含有）
- エンテラン新製品
- ヘンプステッド・ハライド・ホイヤー培地（従来のホイヤー培地の独自配合で、クロラールを60%含有していますが、既知の発がん物質は含まれていません）
- ネオマウント（脂肪族ネオクリアとは互換性があるが、キシレンなどの芳香族溶剤とは互換性がない）
「マウント」の他の種類/意味との対比
ガラスカバーガラスに必要な封入とは対照的に、博物館のガラス容器に収められたよりかさばる標本保存にも、ほぼ同様の封入法が用いられます。しかし、標本調製には全く異なるタイプの封入法が用いられます。これは生物材料でも非生物材料でもよく、さらに「熱間」（圧縮）封入法と「冷間」（鋳造）封入法に分けられます。[ 18 ] [ 19 ]「封入」という名称ですが、組織学における包埋法に近いため、上記の封入法と混同しないでください。他の分野における「封入」という用語は、他にも様々な意味を持ちます。
参照
参考文献
- ^アダム、ジョージ. 顕微鏡に関するエッセイ. 1798
- ^コネット、ジェス（2017年10月4日）「見えないものの芸術」ブリストル24-7 。 2018年3月29日閲覧。
- ^商業ウェブサイト（Ted Pella）のQuartz Microscospe Slides and Cover Slips 。2010年1月23日にアクセス。
- ^石英顕微鏡スライドとカバースリップ。 2015年8月10日アーカイブ。Wayback Machineの商用ウェブサイト（SPI Supplies）のカタログページ。2010年1月23日にアクセス。
- ^ a b c d商業ウェブサイト（EMS）の組織学および光学顕微鏡カタログページ。2010年1月23日にアクセス。
- ^ 「Lentz Microscopy Collection」 . 2024年5月30日閲覧。
- ^ a b商用ウェブサイト（TEKDON）の顕微鏡スライドカタログページ。2010年1月23日にアクセス。
- ^金コーティング顕微鏡スライドとDNAイメージングキットの カタログページ（商業ウェブサイト（Asylum Research）より）。2011年8月31日にアクセス。
- ^ a b顕微鏡検査 - プロトコル カリフォルニア大学サンディエゴ校ムーアズがんセンターによるarchive.today教育ウェブページ（2013年4月3日アーカイブ） 2013年2月7日にアクセス。
- ^ GEの技術仕様（商用ウェブサイトより引用、Ted Pella）。2010年1月23日にアクセス。
- ^ 「カバースリップ補正カラー」顕微鏡リソースセンターオリンパス2017年6月4日閲覧。
- ^ Michael W. Davidson (2010), Optical Aberrations 、フロリダ州立大学のMolecular Expressionsウェブサイトの章。最終更新日：2006年6月15日午後2時39分、アクセス日：2010年1月12日。
- ^ Zippi, Pierre A. (1991). 「花粉学用ストリューマウントにおける同一標本研究のためのSEMおよび光学顕微鏡による標本設置と標本位置決定技術」. Micropaleontology . 37 (4): 407–13 . Bibcode : 1991MiPal..37..407Z . doi : 10.2307/1485913 . JSTOR 1485913 .
- ^ 「Material Safety Data Sheet, Permount Mounting Media」（PDF） . 2018年3月29日閲覧。
- ^ 「ホイヤー溶液封入剤の代替品としてのグリセリンゼリー」 www.mobot.org . 2018年3月29日閲覧。
- ^医療検査科学：理論と実践、 Ochei＆Kolkatker著、446ページ。
- ^蛍光標本のマウント、マウント剤、アンティーク試薬 – UCLA 脳研究所
- ^冷封入剤、熱封入剤、鋳型、圧力チャンバー – 電子顕微鏡科学
- ^アライドハイテック – アライドハイテック製品 | 金属組織学的埋込装置
