エルマン試薬

エルマン試薬^[1]

名前
推奨IUPAC名 5,5′-ジスルファンジイルビス(2-ニトロ安息香酸)
その他の名前 3,3′-ジスルファンジイルビス(6-ニトロ安息香酸) 5-(3-カルボキシ-4-ニトロフェニル)ジスルファニル-2-ニトロ安息香酸 ジチオニトロ安息香酸 5,5′-ジチオビス(2-ニトロ安息香酸)
識別子
CAS番号	69-78-3^はい
3Dモデル（JSmol）	インタラクティブ画像
略語	DTNB
チェビ	チェビ:86228^はい
チェムブル	ChEMBL395814^はい
ケムスパイダー	6018^はい
ECHA 情報カード	100.000.650
EC番号	200-714-4
PubChem CID	6254
ユニイ	9BZQ3U62JX^はい
CompToxダッシュボード （EPA）	DTXSID5058779
InChI InChI=1S/C14H8N2O8S2/c17-13(18)9-5-7(1-3-11(9)15(21)22)25-26-8-2-4-12(16(23)24)10(6-8)14(19)20/h1-6H,(H,17,18)(H,19,20)^はい キー: KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N^はい InChI=1/C14H8N2O8S2/c17-13(18)9-5-7(1-3-11(9)15(21)22)25-26-8-2-4-12(16(23)24)10(6-8)14(19)20/h1-6H,(H,17,18)(H,19,20) キー: KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYAD
笑顔 c1cc(c(cc1SSc2ccc(c(c2)C(=O)O)[N+](=O)[O-])C(=O)O)[N+](=O)[O-]
プロパティ
化学式	C 14 H 8 N 2 O 8 S 2
モル質量	396.34  g·mol ^−1
融点	240～245℃（464～473°F、513～518K）（分解）
危険
GHSラベル： [2]
ピクトグラム
シグナルワード	警告
危険有害性情報	H315、H319、H335
注意事項	P261、P264、P271、P280、P302+P352、P304+P340、P305+P351+P338、P312、P321、P332+P313、P337+P313、P362、P403+P233、P405、P501
特に記載がない限り、データは標準状態（25 °C [77 °F]、100 kPa）における材料のものです。 はい 検証する （何ですか  ？） ^はい北 情報ボックスの参照

エルマン試薬（5,5′-ジチオビス-(2-ニトロ安息香酸)またはDTNB）は、サンプル中のチオール基の数または濃度を定量化するために使用される発色性化学物質です。 ^[3] ジョージ・L・エルマンによって開発されました。

準備

エルマンの原著論文^[3]では、2-ニトロ-5-クロロベンズアルデヒドをカルボン酸に酸化し、硫化ナトリウムを介してチオールを導入し、ヨウ素による酸化反応でモノマーをカップリングさせることでこの試薬を調製しました。現在、この試薬は市販されており、容易に入手可能です。

エルマンテスト

チオールはこの化合物と反応し、ジスルフィド結合を切断して2-ニトロ-5-チオベンゾエート（TNB ⁻ ）を生成します。TNB − は中性およびアルカリ性pHの水中でTNB ^{2−ジアニオンにイオン化します。このTNB 2−}イオンは黄色です。

DTNB とチオール (R-SH) の反応。

この反応は迅速かつ化学量論的に進行し、チオール1モルを加えるとTNB1モルが放出される。TNB ^2−は分光光度計で412 nmの可視光の吸光度を測定することで定量され、希釈緩衝溶液の場合は14,150 M ⁻¹  cm ⁻¹の 吸光係数を使用し、 ^{[4] [5] 、6 M}グアニジニウム塩酸塩や8 M尿素などの高塩濃度の場合は13,700 M ⁻¹  cm ^{−1の吸光係数を使用する。 [5]} Ellmanの1959年の元の論文ではモル吸光度を13,600 M ⁻¹  cm ⁻¹と推定しており、この値は、測定法が改良されたにもかかわらず、この方法のいくつかの現代的な応用で使用されている。^[6]市販のDTNBは完全に純粋ではない可能性があるため、完全に正確で再現性のある結果を得るには再結晶化が必要になる場合がある。 ^[5]

エルマン試薬は、純粋な溶液や血液などの生物学的サンプル中のグルタチオンなどの低分子量チオールの測定に使用できます。 ^[7]また、タンパク質上のチオール基の数を測定することもできます。^[7]

参考文献

1. 5,5′-ジチオビス（2-ニトロ安息香酸）（シグマアルドリッチ）
2. “5,5'-ジチオビス（2-ニトロ安息香酸）”. pubchem.ncbi.nlm.nih.gov . 2021年12月13日閲覧。
3. Ellman GL (1959). 「組織のスルフヒドリル基」. Arch. Biochem. Biophys . 82 (1): 70–7 . doi :10.1016/0003-9861(59)90090-6. PMID  13650640.
4. Collier HB (1973). 「還元型エルマン試薬3-カルボキシラト-4-ニトロチオフェノレートのモル吸光係数に関する考察」. Anal. Biochem . 56 (1): 310–1 . doi :10.1016/0003-2697(73)90196-6. PMID  4764694.
5. Riddles PW, Blakeley RL, Zerner B (1983). 「エルマン試薬の再評価」.酵素構造 第1部. Methods in Enzymology. 第91巻. pp.  49– 60. doi :10.1016/S0076-6879(83)91010-8. ISBN 978-0-12-181991-0. PMID  6855597。
6. Riener CK, Kada G, Gruber HJ (2002). 「エルマン試薬および4,4'-ジチオジピリジンを用いたタンパク質スルフィドリル基の迅速測定」. Anal Bioanal Chem . 373 ( 4–5 ): 266–76 . doi :10.1007/s00216-002-1347-2. PMID  12110978. S2CID  30366479.
7. Riener, Christian K.; Kada, Gerald; Gruber, Hermann J. (2002-07-01). 「エルマン試薬および4,4′-ジチオジピリジンを用いたタンパク質スルフヒドリル基の迅速測定」.分析・生化学分析化学. 373 ( 4–5 ): 266– 276. doi :10.1007/s00216-002-1347-2. ISSN  1618-2642. PMID  12110978. S2CID  30366479.

外部リンク

• スルフィドリルの定量 DTNB、エルマン試薬（誤った吸光係数を使用）