ライフアクト
ライフアクトは、真核生物の生細胞または固定細胞のフィラメント状アクチン（F-アクチン）構造を染色する17アミノ酸の組み換えペプチドです。 [ 1 ] ライフアクトには、細胞の種類、プロトコル、分析目的に応じて利用できるいくつかのタイプと組み合わせがあります
ライフアクトアミノ酸配列
Lifeact 17のアミノ酸配列はMGVADLIKKFESISKEEである。[ 1 ]
種類
- ライフアクトプラスミド
- ライフアクトmRNA
- ライフアクトアデノウイルス
- LifeActレンチウイルス
- LifeActタンパク質
化学
LifeAct-TagGFP2は、他のLifeActコンストラクトと比較して最も広く使用されている蛍光変異体であり、アクチン結合タンパク質であるSaccharomyces cerevisiae Abp140の最初の17アミノ酸で構成されています。Abp140は、 Saccharomyces cerevisiaeおよび他の近縁生物間で高度に保存されています。[ 2 ] Abp140の17アミノ酸断片はGFPに遺伝的に融合されており、生細胞および固定細胞のF-アクチン構造に結合すると緑色の蛍光を発し、顕微鏡下で細胞力学を可視化することができます。細胞力学の解析を含むこれまでの実験では、アフリカツメガエルのユートロフィンと細胞性粘菌（Dictyostelium discoideum）のABP120から得られた蛍光標識ファロイジンとアクチンGFP融合タンパク質に依存していました[ 3 ] [ 4 ]しかし、ファロイジンやGFP融合タンパク質などのマーカーは、タンパク質サイズが大きいため、導入可能な細胞に限定され、相同タンパク質と競合する傾向があります。これらの局在マーカーは細胞の機械的特性やF-アクチン構造に影響を与えるため、信頼性に欠けます。[ 5 ]これらのマーカーの代替として、Life Act-TagGFP2があります。これははるかに小さなタンパク質であり、細胞の力学に影響を与えません。細胞はLifeAct-TagGFP2を短時間で合成するため、費用対効果の高いin vivoマーカーとして適しています。[ 1 ]
生物医学研究への応用
LifeActペプチドは、生物医学研究においてF-アクチン可視化のための汎用マーカーとして利用されてきました。Sawantらによる実験では、ショウジョウバエの卵巣における制御境界細胞の移動をLifeAct GFPを用いて可視化し 、発生および癌化過程における細胞が小規模および大規模集団としてどのように移動するかを調べました。[ 6 ] LifeActは境界細胞および隣接する卵胞細胞のF-アクチンを標識することで、境界細胞膜および突起の詳細な観察を可能にしました。加齢によるアクチン細胞骨格の劣化に関する研究では、年齢の関数としての細胞骨格構造の解析にLifeActが利用されました。C . elegansの様々な組織でLifeActを発現するトランスジェニック系統は、主にイメージングに使用されました。[ 7 ]
参考文献
- ^ a b c Riedl J, Crevenna AH, Kessenbrock K, Yu JH, Neukirchen D, Bista M, Bradke F, Jenne D, Holak TA, Werb Z, Sixt M, Wedlich-Soldner R (2008年7月). 「Lifeact：F-アクチンを可視化するための多用途マーカー」. Nature Methods . 5 ( 7): 605–7 . doi : 10.1038/nmeth.1220 . PMC 2814344. PMID 18536722
- ^ Noma A, Yi S, Katoh T, Takai Y, Suzuki T, Suzuki T (2011年6月). 「アクチン結合タンパク質ABP140は、サッカロミセス・セレビシエのtRNAの32番目の位置にある3-メチルシチジンのメチルトランスフェラーゼである」 . RNA . 17 ( 6): 1111–9 . doi : 10.1261/rna.2653411 . PMC 3096043. PMID 21518805 .
- ^ 「アクチン染色技術 - アクチン染色プロトコル、アクチン染色、アクチンプローブ、アクティ染色488ファロイジン、アクティ染色555ファロイジン、アクティ染色535ファロイジン、アクティ染色670ファロイジン、アクチン染色、アクチン染色488」。www.cytoskeleton.com。2018年9月5日閲覧。
- ^ Hsu ST, Cabrita LD, Fucini P, Dobson CM, Christodoulou J (2009年5月). 「Dictyostelium discoideum由来ゲル化因子（ABP-120）の免疫グロブリンドメインの構造、ダイナミクス、フォールディング」. Journal of Molecular Biology . 388 (4): 865– 79. doi : 10.1016/j.jmb.2009.02.063 . PMID 19281823 .
- ^ Sliogeryte K, Thorpe SD, Wang Z, Thompson CL, Gavara N, Knight MM (2016年1月). 「マイクロピペット吸引法を用いたLifeAct-GFPとactin-GFPの細胞力学に対する異なる影響の評価」 . Journal of Biomechanics . 49 (2): 310–7 . doi : 10.1016 / j.jbiomech.2015.12.034 . PMC 4769141. PMID 26792287 .
- ^ Sawant K, Chen Y, Kotian N, Preuss KM, McDonald JA (2018年8月). 「Rap1 GTPaseは生体内で協調的な集団細胞移動を促進する」 . Molecular Biology of the Cell . 29 : mbcE17120752. doi : 10.1091/mbc.E17-12-0752 . PMC 6249841. PMID 30156466 .
- ^ヒグチ＝サナブリア R、ポール JW、デュリュー J、ベニテス C、フランキーノ PA、トロンズ SU、ガルシア G、ダニエレ JR、モンシエテハディ S、ディリン A (2018 年 8 月)。「老化中のHSF-1によるアクチン細胞骨格の空間制御」。細胞の分子生物学。29：mbcE18060362。土井: 10.1091/mbc.E18-06-0362。PMC 6254583。PMID 30133343。
