NgAgoは一本鎖DNA（ssDNA）誘導型アルゴノート エンドヌクレアーゼであり、N atronobacterium g regoryi A r go nauteの略称である。NgAgoは5'末端がリン酸化され約24ヌクレオチドのssDNA （gDNA）に結合し、標的部位へ誘導する。そして、gDNA部位でDNA二本鎖切断を引き起こす。CRISPR /Casシステムと同様に、NgAgoはChunyu Hanらによってゲノム編集に適していると報告されているが[1]、この報告は再現されていない。Cas9とは異なり、NgAgo–gDNAシステムはプロトスペーサー隣接モチーフ（PAM）を必要としない。
役割
NgAgoは、オフターゲット効果を最小限に抑えると言われる高い精度と効率性から、2016年5月にゲノム編集に有用であると提案されました。ガイド分子と標的分子間の1塩基のミスマッチによって切断効率が低下するため、gDNAの特異性は不可欠です。5'リン酸化ssDNAをガイド分子として使用することで、細胞内オリゴヌクレオチドがNgAgoを誤誘導する可能性を低減します。ガイド分子は、タンパク質発現中にのみNgAgoに結合できます。ガイド分子がロードされると、NgAgoは自由浮遊ssDNAをgDNAと交換できなくなります。ssDNAの設計、合成、濃度調整は、sgRNAを使用するシステムと比較して容易です。必要なssDNAの投与量は、sgRNA発現プラスミドよりも少なくて済みます。[1]
論争
この技術に対する疑念は、6月という早い時期から遺伝子編集フォーラムで提起され、現在も続いている。[2]この手順は再現不可能だという主張が複数ある。この研究を最初に発表したネイチャー・バイオテクノロジーが調査中である。 [3] [4] 2016年11月、 Protein & Cell誌に、この研究と、再現には「優れた実験スキル」が必要だという筆頭著者の主張に疑問を呈する書簡が掲載された。[5]同月、ネイチャー・バイオテクノロジーは3つのグループによる批判的な書簡を掲載し[6]、編集者による元の論文に対する懸念を表明した。[7]著者らは、研究コミュニティが研究結果を再現できない状態が続いていることを理由に、2017年8月3日にネイチャー・バイオテクノロジー誌に掲載された声明で研究を撤回した。[8] 2018年、ハン氏の大学が主導した調査は、ハン氏の研究結果には欠陥があったものの、ハン氏と彼のチームには科学界を欺く意図はなかったと結論付けた。[9] 2019年4月に発表されたプレプリント論文では、NgAgoには遺伝子編集能力があることが判明し、活性タンパク質の精製に関連する困難さのために、これまでの結果を再現することが困難であった可能性があることが示唆されました。[10] [11]
参考文献
- ^ ab ガオ、フェン;シェン、シャオZ;ジャン、フェン。呉、永強。ハン・チュンユ（2016）。 「Natronobacterium gregoryi Argonaute を使用した DNA 誘導ゲノム編集」。ネイチャーバイオテクノロジー。34 (7): 768–773。土井:10.1038/nbt.3547。PMID 27136078。S2CID 4381309 。（撤回済み、doi :10.1038/nbt0817-797a、PMID 28787423、Retraction Watchを参照）
- ^ Blow, Nathan (2016年10月4日). 「編集すべきか否か：NgAgoの物語」. BioTechniques . 2016年11月29日閲覧。
- ^ Cyranoski, David (2016). 「複製、嘲笑、そして隠遁者：NgAgo遺伝子編集をめぐる論争が激化」Nature . 536 (7615): 136– 137. Bibcode :2016Natur.536..136C. doi : 10.1038/536136a . PMID 27510204.
- ^ Cyranoski, David (2016). 「査読付き論文におけるNgAgo遺伝子編集論争の激化」Nature 540 ( 7631): 20–21 . doi : 10.1038/nature.2016.21023 . PMID 27905463.
- ^ バージェス、ショーン;チェン、リンジャオ。グー、フェン。ファン・ジュンジュ。黄知偉。リン、シュオ。リー・ジンソン。リー、ウェイ。秦、魏。サン、ユジエ。周松陽。魏、文生。呉、強。ワン・ハオイ。王暁群。シオン、ジンウェイ。習、建中。ヤン、ホイ。周、斌。張、薄（2016 年 11 月 15 日）。 「ンアゴについての質問」。タンパク質と細胞。7 (12): 913–915。土井:10.1007/s13238-016-0343-9。PMC 5205665。PMID 27848216。
- ^ イ・スンファン;トゥルキアーノ、ジャンドメニコ。阿多 博隆;ソマイラ州ナウシーン。ロミート、マリアンナ。ルー・ジェンクン。リュ・ソクミン。エッカー、スティーブン C;キャットメン、トニ。キム・ジンス（2016年11月28日）。 「Natronobacterium gregoryi Argonaute を使用した DNA 誘導ゲノム編集の検出の失敗」。ネイチャーバイオテクノロジー。35 (1): 17–18 .土井:10.1038/nbt.3753。PMC 5662444。PMID 27893702。
- ^ Gao, Feng; Shen, Xiao Z.; Jiang, Feng; Wu, Yongqiang; Han, Chunyu (2017). 「補遺：編集者による懸念表明：Natronobacterium gregoryi Argonauteを用いたDNA誘導ゲノム編集」Nature Biotechnology 35 ( 5): 481. doi :10.1038/nbt0517-481a. PMID 28486453.
- ^ Cyranoski, David (2017). 「著者らが物議を醸したNg Agoの遺伝子編集研究を撤回」 Nature . doi : 10.1038/nature.2017.22412.
- ^ Cyranoski, David (2018). 「大学、NgAgo遺伝子編集研究の著者らの欺瞞行為を否定」 Nature . doi : 10.1038/d41586-018-06163-0. S2CID 149931718.
- ^ 「遺伝子編集のための新たなタンパク質が疾患治療と持続可能な製造を改善する可能性」2019年4月3日。
- ^ Solomon, Kevin (2019). 「大腸菌におけるNgAgo増強相同組換えはDNAエンドヌクレアーゼ活性によって媒介される」bioRxiv 10.1101/597237 .
