オクターロニー二重免疫拡散法

免疫拡散後のオクターロニー二重免疫拡散プレートの写真。ここでは、抗原の力価を定量しています。中央のウェルには抗体があり、周囲のウェルには対応する抗原の濃度が低下しています

上部の斑点の間に同一性がないことを示すオウチャロニーパターン

上部の斑点間の完全な同一性を示すオウチテルロニーパターン

上部の斑点が部分的に同一であることを示すオウチェルロニーパターン

オークテルロニー法（受動二重免疫拡散法とも呼ばれる）は、抗体および抗原（免疫グロブリンや抽出核抗原など）の検出、同定、定量に用いられる免疫学的手法である。この手法は、分離細菌からのジフテリア毒素産生を評価するために1948年にこの検査法を開発したスウェーデンの医師、オルヤン・オークテルロニーにちなんで名付けられた。^{[ 1 ]}

手順

寒天ゲルまたはアガロースゲルに一連の穴（ウェル）を形成するようにゲルプレートを切ります。目的のサンプル抽出物（例えば、扁桃腺組織から採取したヒト細胞）を1つのウェルに入れ、血清または精製抗体を別のウェルに入れ、プレートを48時間放置して発色させます。この間、サンプル抽出物中の抗原と抗体はそれぞれそれぞれのウェルから拡散します。2つの拡散面が出会う場所で、いずれかの抗体がいずれかの抗原を認識すると、抗原と結合して免疫複合体を形成します。免疫複合体はゲル中で沈殿し、細い白い線（沈降線）を形成します。これは抗原認識の視覚的な特徴です。^{[ 2 ] [ 3 ]}

この方法は、異なる抗原混合物が入った複数のウェルと、異なる抗体または抗体混合物が入った複数のウェルを並行して実施することができ、抗原-抗体反応性は、どのウェル間で沈殿が観察されるかを観察することで確認できます。複数のウェルを使用する場合、選択した抗原と抗体の反応性に基づいて、様々な結果が考えられます。等価線ゾーンは、完全な同一性（つまり、実線）、部分的な同一性（つまり、片方の端に突起がある実線）、または非同一性（つまり、2本の線が完全に交差する）を示します。

クマシーブリリアントブルーなどの染色剤を使用することでアッセイの感度を高めることができ、これは沈降線が最大限に見えるまでアッセイの染色と脱色を繰り返すことによって行われます。 ^{[ 1 ]}

理論

ほとんどの抗原で沈殿が起こるのは、抗原が多価（つまり、抗体が結合できる分子あたり複数の抗原決定基を持つ）であるためです。抗体は少なくとも2つの抗原結合部位を持ち（免疫グロブリンMの場合は最大10個の抗原結合部位を持つ多量体複合体があります）、抗原と抗体の大きな凝集体またはゲル状の格子が形成されます。実験的には、一定量の抗体溶液に抗原の量を増やしていきます。最初は抗原濃度が低いため、すべての抗体が沈殿物に含まれています。これは抗体過剰ゾーン（つまりプロゾーン現象）と呼ばれます。さらに抗原を加えると、沈殿するタンパク質の量が増加し、抗原/抗体分子の比率が最適な状態になります。これは当量ゾーンまたは当量点として知られています。溶液中の抗原の量が抗体の量を超えると、沈殿量は減少します。これは抗原過剰ゾーンとして知られています

参考文献

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2. モティカ、エドワード・J. (2015).エビデンスに基づく免疫学の歴史的展望. エルゼビア. p. 360. ISBN 978-0-12-398381-7。
3. ポール、ウィリアム・E.編 (2008). 「免疫拡散法とオクターロニー法」 .基礎免疫学（第6版）. リッピンコット・ウィリアムズ＆ウィルキンス. pp.  176– 177. ISBN 9780781765190。176ページ177ページ

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• 「BSCI423: 実験5. 降水」メリーランド大学カレッジパーク校 コンピュータ・数学・自然科学学部. 2012年2月5日時点のオリジナルよりアーカイブ。 2012年11月23日閲覧。

外部リンク

• シミュレーターカリフォルニア大学アーバイン校のWayback Machineに2007年5月22日にアーカイブ
• 「オウチェターロニー二重免疫拡散法」（写真） 。 2017年5月15日閲覧。完全な同一性と非同一性の未染色沈降線を示す Ouchterlony 二重免疫拡散プレートの写真。
• 「拡散パターン」免疫拡散の原理と応用。2019年12月11日時点のオリジナルよりアーカイブ。 2017年5月19日閲覧。完全に同一、部分的に同一、非同一の染色沈降線を示す Ouchterlony 免疫拡散パターンの写真。
• 「オウチャロニー試験」 YouTubeバイオ・ラッド・ラボラトリーズ 2012年10月16日