フェノール抽出
DNAおよびRNAの精製手順

フェノール抽出は、フェノール溶液を用いて核酸サンプルを精製する実験技術です。フェノールは、特にタンパク質を強力に変性させることで核酸の保存剤として機能し、水と混和しないという特性から、核酸抽出に広く用いられています。

コールタールなどの原料からフェノールを抽出・単離するプロセスを指す場合もあります。精製されたフェノールは、多くの工業用・医療用化合物に使用され、また、いくつかの合成反応の前駆体としても使用されます。

核酸のフェノール抽出

フェノール（C 6 H 5 OH）は、ヒドロキシル基（-OH）に結合したフェニル基（-C 6 H 5）からなる水溶性化合物です。

フェノール抽出は、細胞溶解物から核酸サンプルを精製するために広く使用されている技術です。[1]核酸を得るためには、細胞を溶解し、核酸を他の細胞成分から分離する必要があります。

フェノールは水よりも密度が高い極性物質です（1.07 g/cm 3 [2]、水の密度は1.00 g/cm 3です）。フェノールを水-フェノール溶液に懸濁すると、変性したタンパク質や不要な細胞成分はフェノールに溶解し、極性核酸は水相に溶解します。[3]次に、溶液を遠心分離してフェノールと水を有機相と水相に分離します。精製された核酸は、溶液の水相から沈殿させることができます。

フェノールはクロロホルムと組み合わせて使用​​されることが多い[4]。等量のクロロホルムとフェノールを添加することで、水相と有機相を明確に分離することができる。クロロホルムとフェノールは混和性があり、フェノール単独よりも濃度の高い溶液を形成するため、有機相と水相の分離が容易になる。クロロホルムの添加は、水相を除去して精製された核酸サンプルを得る際に有用である。

溶液のpHは、抽出の種類ごとに調整する必要があります。DNA抽出の場合、pHは7.0～8.0に調整されます。RNA特異的抽出の場合、pHは4.5に調整されます。pH 4.5では、水素イオンがリン酸基の負電荷を中和し、DNAは有機相に溶解し、RNAは水相に分離されます。

参照

参考文献

  1. ^ カービー、KS (1957年7月1日). 「デオキシリボ核酸の分離のための新しい方法：デオキシリボ核酸とタンパク質間の結合の性質に関する証拠」.生化学ジャーナル. 66 (3): 495– 504. doi :10.1042/bj0660495. ISSN  0264-6021. PMC 1200047.  PMID 13459887  .
  2. ^ “フェノール”. Sigma-Aldrich . 2022年7月9日時点のオリジナルよりアーカイブ。 2022年7月9日閲覧。
  3. ^ Oswald, Nick (2021年10月18日) [2008年2月12日]. 「基礎：フェノール法によるDNA抽出の仕組み」. Bite Size Bio . 2020年7月17日時点のオリジナルよりアーカイブ。 2022年7月9日閲覧。
  4. ^ Chan, P; Chan, D; To, K; Yu, M; Cheung, J; Cheng, A (2001年5月). 「ヒトおよびウイルスDNAのPCR増幅におけるパラフィンワックス包埋組織からの抽出法の評価」. Journal of Clinical Pathology . 54 (5): 401– 403. doi :10.1136/jcp.54.5.401. ISSN  0021-9746. PMC 1731425. PMID 11328843  . 
  • 生理学.med.cornell.edu
  • ワイズギーク
「https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=フェノール抽出&oldid=1306779809」より取得