トリプシン処理

Chemical process of cell dissociation by using trypsin

トリプシン処理は、タンパク質を分解するタンパク質分解酵素であるトリプシンを用いて、培養容器に付着した細胞を分離するプロセスです。細胞培養にトリプシンを添加すると、細胞が容器に付着するのを可能にするタンパク質が分解されます。トリプシン処理は、細胞を新しい容器に移す際によく用いられます。トリプシン処理が完了すると、細胞は懸濁液となり、丸みを帯びた外観になります。

実験目的では、細胞はプラスチック製のフラスコやプレートなどの容器で培養されることがよくあります。これらのフラスコでは、細胞は増殖に必要な必須栄養素を含む培地で培養され、細胞は成長するにつれて容器や他の細胞に接着します。

この細胞培養または組織培養のプロセスでは、細胞を容器から、そして細胞同士を分離する方法が必要です。消化管によく存在する酵素であるトリプシンは、容器への接着や細胞間の接着を促進するタンパク質を「消化」するために使用できます。

細胞が容器からはがれたら、合成トリプシンでない限り、トリプシンを不活性化する必要があります。時間の経過とともに細胞表面のタンパク質も切断され、細胞の機能に影響を与えるためです。^[1]血清にはプロテアーゼ阻害剤が含まれているため、トリプシンを不活性化するために使用できます。^[2]これらの阻害剤が存在するため、培養容器をトリプシンで処理する前に血清を除去し、細胞が培養表面からはがれるまで培養容器に血清を再び追加してはなりません。この剥離は顕微鏡を使用した目視観察によって確認できます。

トリプシン処理は、接着細胞を新しい容器に移したり、実験のために観察したり、細胞の一部を除去することで培養フラスコ内の集密度を下げたりするためによく使用されます。

参考文献

^ Huang, HL; Hsing, HW; Lai, TC; Chen, YW; Lee, TR; Chan, HT; Lyu, PC; Wu, CL; Lu, YC; Lin, ST; Lin, CW; Lai, CH; Chang, HT; Chou, HC; Chan, HL (2010). 「哺乳類細胞における細胞継代培養中のトリプシン誘導性プロテオーム変化」. Journal of Biomedical Science . 17 (1): 36. doi : 10.1186/1423-0127-17-36 . PMC 2873939. PMID 20459778
^ Jacobsson, Kjell (1953). 「ヒト血清中の2種類のトリプシンインヒビターの電気泳動による検出」. Scandinavian Journal of Clinical and Laboratory Investigation . 5 (1): 97– 98. doi :10.3109/00365515309093519. PMID 13064621.

[1] Huang, HL; Hsing, HW; Lai, TC; Chen, YW; Lee, TR; Chan, HT; Lyu, PC; Wu, CL; Lu, YC; Lin, ST; Lin, CW; Lai, CH; Chang, HT; Chou, HC; Chan, HL (2010). 「哺乳類細胞における細胞継代培養中のトリプシン誘導性プロテオーム変化」. Journal of Biomedical Science . 17 (1): 36. doi : 10.1186/1423-0127-17-36 . PMC 2873939. PMID 20459778

[2] Jacobsson, Kjell (1953). 「ヒト血清中の2種類のトリプシンインヒビターの電気泳動による検出」. Scandinavian Journal of Clinical and Laboratory Investigation . 5 (1): 97– 98. doi :10.3109/00365515309093519. PMID 13064621.