抽出可能な核抗原

抽出可能核抗原（ENA）は、100種類を超える可溶性の細胞質抗原および核抗原です。これらは生理食塩水を用いて細胞核から除去できるため、「抽出可能」と呼ばれ、Ro、La、Sm、RNP、Scl-70、Jo1という6つの主要なタンパク質で構成されています。ほとんどのENAはスプライソソームまたはヌクレオソーム複合体の一部であり、小型核リボ核タンパク質（snRNPS）の一種です。核内での位置とスプライソソームまたはヌクレオソームとの結合により、これらのENAは他のRNAやポリメラーゼなどのタンパク質と結合します。このようなENAの性質のため、臨床使用のために精製および定量することが困難な場合が多くあります。[ 1 ]

臨床応用

抽出可能核抗原パネル（ENAパネル）は、細胞核内のタンパク質と反応する血液中の自己抗体の存在を検査します。これは通常、抗核抗体（ANA ）検査が陽性だった場合の追跡調査として、また自己免疫疾患の症状が現れている場合に行われます。ANAは自己抗体の有無を検査し、ENAパネルは自己抗体が細胞核内のどのタンパク質を認識するかを評価します。ENAパネルは、自己免疫疾患の診断、区別、および進行の監視に役立ち、簡単な採血で実施されます。自己抗体のレベルは生涯にわたって変動する可能性がありますが、いったん自己抗体が発生すると、それ以降も自己抗体は残ります。これらの抗原に対する自己抗体は、特定の結合組織疾患に関連しています。実際、抗ENA陽性サンプルの84.3%で、ANA試薬も検出されました。[ 1 ]抗ENA自己抗体検査は、自己免疫疾患の追加検証として役立ちます。なぜなら、ANA検査が陽性であるだけでは診断には不十分だからです。実際、健康な患者でも低レベルのANAが見つかることがあります。抗ENA検査の用途は、特定のグループから患者グループを除外することから、結合組織疾患、疾患活動性のモニタリングまで多岐にわたります。本質的には、特定の自己抗体が存在しない場合に臨床医は特定の自己免疫疾患を除外することができ、これらの自己抗体のレベルが増加または減少する場合に臨床医は疾患の進行を追跡することができます。抗ENAの存在を確認するには、現在、偽陽性を避けるために2つ以上の方法を使用して抗ENAを確認することが推奨されています。自己免疫性結合組織疾患（CTD）の診断は、臨床症状と徴候の分析だけでなく、核抗原に対する自己抗体の同定によっても行われます。 2002年の論文では、免疫学研究室で抗ENA抗体を測定するために用いられる診断検査の比較と、検査と報告の改善策が検討されています。二重免疫拡散法（DID）と対免疫電気泳動法（CIEP）という2種類のゲル電気泳動法は、CTD患者におけるこれらの抗体の臨床的意義と役割に関する情報を得るために用いられています。[ 2 ]

テクニック

ゲルベース

ENAは発見されて以来、結合組織疾患の診断ツールとして利用されてきました。初期の研究では、抗ENAとその疾患との関連性を同定するために、広く用いられていた2つのゲルベースの技術、二重免疫拡散法（DID）[ 3 ]と対免疫電気泳動法（CIEP）が使用されました。これらの技術はどちらも、有効な結果を得るために抗原の沈殿を必要とします。調査対象の抗ENAに応じて、一方の技術が他方よりも使用される場合があります。例えば、Scl-70抗原は負に帯電しにくいため、抗原が抗体と同じ方向に移動する可能性があります。その結果、抗体-抗原複合体は沈殿せず、無効な結果につながります。[ 4 ]さらに、シェーグレン症候群で一般的に同定される一部の抗SS-B抗体は、この方法では検出されない可能性があります。しかし、この方法は経済的に実現可能であり、診断を確定するための特異性も高くなります。これらのゲルベースの技術からのデータを見る際には、アッセイ感度と疾患感度という2つの感度に注意する必要があります。アッセイ感度とは、抗体が存在するかどうかを認識する能力であり、疾患感度とは、疾患において抗体が出現する頻度を認識する能力です。ゲルベースの技術は疾患感度に限界があるため、疾患感度を低下させることなくアッセイ感度を高めるための他の技術が研究されてきました。例えば、全身性エリテマトーデス（SLE）患者では、ゲルベースのアッセイを用いた場合、抗SM抗体が検出できるのはわずか8～40%です。CIEPはDIDよりも感度が高いことが示されています。[ 5 ]

血球凝集反応、ELISA、ウェスタンブロット

ENA を識別し、特定の疾患と関連付けるために、受動赤血球凝集反応、酵素免疫測定法 (ELISA)、ウェスタンブロッティング (WB) の 3 つの追加技術を使用できます。受動赤血球凝集反応は 1970 年代後半に人気がありましたが、これを使用した研究はほとんどなく、抗 Sm 抗体と抗リボ核タンパク質 (RNP) 抗体に限定されていました。[ 5 ]酵素免疫測定法(ELISA) は、実行が簡単で、定量的で、大量出力できるため、抗 ENA の検査に最も広く使用されている技術になりました。この方法は測定感度が高く、大量処理の研究室では効率的ですが、他の技術に比べて疾患特異性が大幅に低くなります。これは、ENA が細胞核内の複合体と関連しているため、多額の費用をかけずに ENA を適切に分離できないためです。 ELISA法に関するもう一つの懸念は、SLEを発症していない患者においても抗Sm抗体が報告されていることであり、過剰な検査につながる可能性があるが、これは抗原源の品質に起因する可能性がある。[ 5 ]ウエスタンブロッティング法には、立体構造エピトープを標的とした抗体を検出できないという大きな欠点がある。さらに、偽陽性が生じる可能性があり、他の手法よりも疾患特異性が低い。それぞれの手法には長所と短所があるが、ELISA法は偽陽性の可能性（偽陰性よりも危険性は低い）と費用という、最も軽微な欠点を持つ。[ 5 ]

多くの検査室では、特異性を犠牲にすることなく効率を向上させるために、これら2つの技術を組み合わせて使用​​しています。欧州コンセンサスワークショップでは、抗ENA抗体陽性のスクリーニングにはELISA法を用いることが現在推奨されています。陽性と判定された検体には、CIEPなどのより特異性の高い検査を実施します。[ 6 ]

免疫学研究室で検出に用いられる主な6つの抗原は、 Ro、La、Sm、RNP、Scl-70、Jo1です[ 7 ]。これらはオクターロニー二重免疫拡散法によってスクリーニングされ、免疫ブロット法によって確認されます。抗核抗体検査では、これらの抗原は斑点模様を呈します[ 8 ] 。

用語

ENAはもともと、細胞核の生理食塩水抽出物中にあるタンパク質を指していました。[ 9 ]その後、その成分はより明確に特定され、実際には多くの細胞質分子が含まれています。しかし、この誤った名称はそのまま残っています。これらのタンパク質はさまざまなRNA分子と密接に関連しているため、リボ核タンパク質と呼ばれますが、それらに使われる命名法はしばしば混乱の原因となっています。Sm、Ro、およびLaは、これらが最初に見つかった患者の姓の最初の2文字にちなんで命名されました。シェーグレン症候群に関連する2つのタンパク質は、それぞれ抗原Aおよび抗原Bとして説明されていましたが、現在ではそれぞれRoおよびLaと同一であることがわかっています。つまり、SS-A = Ro、SS-B = Laです。

ENA（抽出可能核抗原）パネル検査は、細胞核内のタンパク質に対する自己抗体を検査します。「抽出可能」という用語は、生理食塩水と一般的なタンパク質を用いて核から抗原を除去できることに由来しています。これらの検体の同定方法から、生理食塩水抽出抗原に対する抗体とも呼ばれます。[ 9 ]

エナ

抗ENAは、混合性結合組織病（MCTD）、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデスのスクリーニングによく使用される抗体のグループであり、通常は6つの検査で構成されています。[ 10 ]

  • 抗Sm（SLE用）
  • 抗RNP（MCTD用）
  • 抗La/抗SS-B（シェーグレン症候群用）
  • 抗Ro/抗SS-A（シェーグレン症候群用）
  • 抗Scl70（強皮症用）
  • 抗Jo（皮膚筋炎用）

これらの検査の感度と特異度は、使用するアッセイの種類によって異なり、検査機関によって異なります。以下の表は、ELISA法を用いたSLE検出におけるENA抗体の感度と特異度を示しています。

抗体（ELISA法で検査）SLEに対する感度（％）SLEに対する 特異度（％）
アンチロ（SS-A）6180～93
アンチラ（SS-B）27～3588～97
反SM34～4588～100
抗RNP39～6484～97
すべての値の参照: [ 11 ]

さらに、ENA検査はセリアック病などの小麦関連疾患の研究にも利用されています。2018年に実施された研究では、小麦関連疾患の患者を対象に10種類の抗ENA抗体のスクリーニングが行われました。

  • SSA（ロ）
  • SSB（ラ）
  • RNP/Sm
  • ジョー1
  • 小
  • Scl-70
  • クロマチン
  • セントロメア
  • ヒストン
  • RNAポリメラーゼIII

セリアック病患者の73%が抗ヒストン抗体陽性を示し、最も多く認められました。抗ヒストン抗体は、薬剤誘発性エリテマトーデスに典型的に伴います。これは、小麦関連疾患の患者において自己免疫疾患の可能性が高いことを示唆しています。[ 12 ]

参考文献

  1. ^ a b Banhuk, Fernanda Weyand; Pahim, Bruna Corrêa; Jorge, Alex Sandro; Menolli, Rafael Andrade (2018年9月30日). 「ブラジルの公立病院における抗核抗原抗体、抗核抗体、および自己免疫疾患の関係」 . Autoimmune Diseases . 2018 : 1–8 . doi : 10.1155/2018/9856910 . PMC  6186355. PMID  30364021 .
  2. ^ Phan, Tri Giang; Wong, Richard CW; Adelstein, Stephen (2002). 「抽出可能な核抗原に対する自己抗体：検出と解釈をより有意義にする」 .臨床および診断検査免疫学. 9 (1): 1– 7. doi : 10.1128/CDLI.9.1.1-7.2002 . PMC 119916. PMID 11777822 .  
  3. ^ 「Abbexa - 抗体、タンパク質、ELISAキット」。
  4. ^ Bunn, C.; Kveder, T. (1996). 「可溶性細胞抗原に対する抗体の検出のための対免疫電気泳動および免疫拡散法」. van Venrooij, WJ; Maini, RN (編). 『疾患の生物学的マーカーマニュアル』 . Springer Netherlands. pp.  25– 36. doi : 10.1007/978-94-011-1670-1_3 . ISBN 978-94-011-1670-1。
  5. ^ a b c d Lock, RJ; Unsworth, DJ (2001年3月). 「抽出可能な核抗原に対する抗体。技術の進歩は臨床解釈に影響を与えたか？」 . Journal of Clinical Pathology . 54 (3): 187–90 . doi : 10.1136/jcp.54.3.187 . PMC 1731369. PMID 11253128 .  
  6. ^ Yiannaki, EE; Tzioufas, AG; Bachmann, M; Hantoumi, J; Tsikaris, V; Sakarellos-Daitsiotis, M; Sakarellos, C; Moutsopoulos, HM (1998). 「La/SSBに対する自己抗体の検出におけるLa/SSBの合成線状エピトープ類似体の有用性：特異性、感度、および方法の比較」 . Clinical and Experimental Immunology . 112 (1): 152– 158. doi : 10.1046 / j.1365-2249.1998.00558.x . PMC 1904932. PMID 9566804 .  
  7. ^ Prince, HE;​​ Hogrefe, WR (1998). 「抽出可能な核抗原を認識する抗体の検出のためのライン免疫ブロットアッセイの評価」 . Journal of Clinical Laboratory Analysis . 12 (5): 320–4 . doi : 10.1002/(sici)1098-2825(1998)12:5<320::aid-jcla13>3.0.co;2- x . PMC 6807698. PMID 9773966 .  
  8. ^ 「免疫病理学」。
  9. ^ a b「抽出可能核抗原抗体（ENA）パネル」 Lab Tests online . 2018年6月21日. 2019年4月10日閲覧。
  10. ^ ENAテスト（QUANTA Lite）製品シート。inovadx.com。URL： http://www.inovadx.com/Products/di_pdfs/708555/628555rEnglish.pdf ENA。アクセス日：2007年11月5日。
  11. ^ Lock, R; Unsworth, D (2001). 「抽出可能な核抗原に対する抗体。技術の進歩は臨床解釈に影響を与えたか？」臨床病理学ジャーナル54 (3): 187– 190. doi : 10.1136/jcp.54.3.187 . PMC 1731369 . PMID 11253128 .  
  12. ^ Yang, Yuanyuan; Krishna, Karthik; Deshpande, Payal; Ranganathan, Vinodh; Jayaraman, Vasanth; Wang, Tianhao; Bei, Kang; Krishnamurthy, Hari (2018年6月18日). 「小麦関連疾患における抽出可能な核自己抗体の高頻度」 . Biomarker Insights . 13. doi : 10.1177/1177271918782893 . PMC 6024268. PMID 29977112 .  
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