| アルカリ変性試験 | |
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| 目的 | 新生児血液と母体血液を区別する |
アルカリ変性試験( AテストまたはAptテストとも呼ばれる)は、胎児または新生児の血液を新生児の便や嘔吐物に含まれる母親の血液、あるいは母親の膣からの血液と区別するために用いられる医療検査である。[ 1 ] [ 2 ]
この検査は、アメリカの小児眼科医であるレナード・アプト(1922~2013)[ 3 ]によって開発されました。この検査はもともと、新生児の血便の原因を特定するために使用されていました。その後、あらゆる原因の血液サンプル中の胎児ヘモグロビンと母体ヘモグロビンを区別できるように改良されました。[ 4 ]
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これは、分娩時に膣から排出される血液が母体由来か胎児由来か(前置胎盤か前置血管か)を判別するために用いられます。これは、胎児のHbFは酸とアルカリに耐性があるのに対し、HbAを含む母体血液は酸とアルカリに敏感であるという原理に基づいています。
この検査は、母体と胎児のヘモグロビンの違いに基づいています。母体の血液には、2つのαサブユニットと2つのβサブユニットからなる成人ヘモグロビン(別名ヘモグロビンAまたはHbA、つまり正常な成人ヘモグロビン)が含まれています。胎児の血液には、2つのαサブユニットと2つのγサブユニットからなる胎児ヘモグロビン(別名ヘモグロビンFまたはHbF、つまり正常な胎児ヘモグロビン)が含まれています。この組成の違いにより、異なるタイプのヘモグロビンに異なる化学的性質が与えられます(HbFはHbAよりも溶存血液中の酸素に対する親和性が高いため、赤ちゃんは母親の血液から酸素を取り込むことができます)。胎児ヘモグロビンはアルカリ(塩基)変性に対して耐性がありますが、成人ヘモグロビンはそのような変性の影響を受けやすいです。したがって、血液検体を水酸化ナトリウム(NaOH)にさらすと、成人ヘモグロビンは変性しますが、胎児ヘモグロビンは変性しません胎児ヘモグロビンは顕微鏡で見るとピンク色に見えますが、成人ヘモグロビンは黄褐色に見えます。
血液を少量の滅菌水と混合し、赤血球を溶血させて遊離ヘモグロビンを生成します。次に、サンプルを数分間遠心分離します。ピンク色のヘモグロビンを含む上清液5mLにつき、1% NaOH 1mLを加えます。2分後に液の色を評価します。胎児ヘモグロビンはピンク色のままですが、成人ヘモグロビンは黄褐色に変化します。これは、成人ヘモグロビンが不安定で、水酸化物リガンドを持つヘマチンに変化するためです。[ 5 ]