クライハウアー・ベトケ検定
クライハウアー・ベトケ検定
クライハウアーテストでは、胎児の赤血球はバラ色に見えますが、成人の赤血球は「幽霊」のように見えます。
目的胎児ヘモグロビン移行を測定

クライハウアー・ベトケ（KB）テスト、クライハウアー・ベトケ（KB）染色、クライハウアーテスト、または酸溶出テストは、胎児から母親の血流に移行した胎児ヘモグロビンの量を測定するために使用される血液検査です。[ 1 ]通常、 Rh陰性の母親に対して行われ、母親のRh抗体の形成を抑制し、将来のRh陽性の子供のRh疾患を予防するために必要なRh（D）免疫グロブリン（RhIg）の投与量を決定します。 [ 2 ] 1957年にこれを説明したエンノ・クライハウアーとクラウス・ベトケにちなんで名付けられました。[ 3 ]

テストの詳細

KBテストは、胎児母体間出血（FMH）を定量化する標準的な方法です。この検査は、胎児ヘモグロビンの酸に対する耐性の違いを利用します。母体血液から標準血液塗抹標本を作製し、酸浴に浸します。これにより、赤血球から成人ヘモグロビンは除去されますが、胎児ヘモグロビンは除去されません。その後、シェパード法[ 4 ]を用いて染色すると、胎児細胞（胎児ヘモグロビンを含む）はバラ色に見えますが、成人赤血球は「ゴースト」のようにしか見えません。顕微鏡下で2,000個の細胞を計数し、胎児細胞と母体細胞の割合を計算します[ 2 ] 。

陽性反応を示した場合、産後検診でフォローアップ検査を実施し、偽陽性の可能性を排除する必要があります。偽陽性は、胎児ヘモグロビン値の持続的な上昇を引き起こす母体の異常ヘモグロビン症（例えば鎌状赤血球症）によって引き起こされる可能性があります。[ 2 ]

フローサイトメトリーなどのより高価で技術的に高度な他の方法と比較すると、KB染色はより高度な方法と同様にFMHの検出において感度が高いことが示されています。[ 1 ]しかし、文献では、フローサイトメトリー法と比較して、KBテストは母体血液サンプルにF細胞が存在する場合に偽陽性の結果が出るため、FMHを過大評価することが示されています。バックグラウンドカウントエラーにより、実際にはそのような出血がないのに胎児の出血量が5mLと推定される可能性がありますが、ほとんどの研究室で利用可能な標準的な方法では、より重度のFMHが発生した場合に偽陽性が返される可能性は極めて低いとされています。[ 2 ]

独自の技術

方法

毛細血管血または静脈血をヘパリン、シュウ酸、クエン酸、EDTAなどの抗凝固剤に採取し、薄層塗抹標本を作成する。塗抹標本を10～60分間風乾し、80 vol%エタノール中で20～22 °Cで5分間固定し、水道水ですすぎ、風乾する。次に、フィルムをクエン酸-リン酸緩衝液に37 °Cで5分間浸し、約3分間穏やかに振盪する。スライドを水道水ですすぎ、乾燥させ、エールリッヒ酸ヘマトキシリンで3分間染色し、水ですすぎ、再び乾燥させる。エリスロシンで3分間対比染色する。最後にすすいだ後、フィルムを乾燥させ、光学顕微鏡で観察する。[ 5 ]

元の方法の結果

ヘモグロビンF細胞はエリスロシンで濃く染色され、ヘモグロビンA細胞はゴースト細胞のように、中間細胞はピンク色に染まります。ヘモグロビンAを含む網状赤血球は中間細胞のように、また細胞内顆粒化を示す場合があります。封入体（ハインツ小体、沈殿したα鎖またはβ鎖）は、溶出細胞中に様々な大きさの緻密な封入体として観察されます。ヘモグロビンAは、オキシヘモグロビン、メトヘモグロビン、シアンメトヘモグロビン、還元ヘモグロビン、または一酸化炭素ヘモグロビンのいずれであっても溶出されます。

ヘモグロビンF細胞の定量

胎児（HbF）細胞としてカウントされた細胞に緑色のマークが付いたKB染色、上部の不完全な着色細胞と右側の小さすぎる細胞に赤いマークが付いたKB染色

SchneiderとLudwig [ 6 ]およびBartschらによって開発された方法が推奨されます。ヘモグロビンFの細胞内分布の測定には、Shepard、Weatherall、およびConleyらによる半定量法を用いることもできます。

正常値

Kleihauer によって最初に発表された成人のヘモグロビン F 細胞の正常値は 0.01% 未満でしたが、満期新生児では 90% を超えています。

用途

胎児・母体出血の重症度推定

FMH 検査が陽性の場合、胎児死亡の原因である可能性が高いかどうかを判断するには、失われた胎児血液量の合計の割合を計算し、次の既知の関係に基づいて適切な調整を行う必要があります。

これらの制約を適用すると、次の式が得られます。

PFB＝（3200）（FC）（FW）（MC）{\displaystyle PFB={\frac {(3200)(FC)}{(FW)(MC)}}}

どこ

    • PFB{\displaystyle PFB}胎児の血液損失の割合です。
    • FC{\displaystyle FC}胎児赤血球の観察数です。
    • MC{\displaystyle MC}は、観測された母体の赤血球数です（注： は、観測された母体と胎児の赤血球の総数です）。MC＝TC−FC{\displaystyle MC=TC-FC}TC{\displaystyle TC}
    • FW{\displaystyle FW}胎児の死産体重（キログラム単位）です。

RhDバイアルの数

必要となるRho(D)免疫グロブリンバイアルの数を推定するには、以下の式を仮定します。[ 7 ]

  • 胎児血液量（mL）＝胎児細胞の割合×50
  • 必要な300 mcg RhIGバイアルの数 = 胎児血液量/30 mL

これら2つの式を組み合わせると次のようになる。[ 7 ]

  • バイアル数 = 胎児細胞の割合 x 50 / 30

これはほぼ次と等しくなります:

  • バイアル数 = 胎児細胞の割合 x 1.7

実際には、小数点以下の数値が5以上の場合は切り上げられ、1バイアルが追加されます。[ 7 ]

死産の解決

KB染色を行い、総赤血球数を観察したところ、そのうち胎児赤血球であることがわかったとします。さらに、検討対象の胎児の死産体重が であると仮定します。すると、胎児の血液損失率はおよそ以下の通りであると結論付けられます。 TC＝5000{\displaystyle TC=5000}FC＝200{\displaystyle FC=200}FW＝2.0けグラム{\displaystyle FW=2.0kg}

PFB＝（3200）（FC）（FW）（MC）＝（3200）（200）（2.0）（4800）＝2003＝66.667{\displaystyle PFB={\frac {(3200)(FC)}{(FW)(MC)}}={\frac {(3200)(200)}{(2.0)(4800)}}={\frac {200}{3}}=66.667}

を 5 つの有効数字まで上げます。したがって、検討中の胎児は FMH により 66.667% (3 分の 2) の血液を失ったと結論付けます。一般に、 の値がどのようなものであっても、特に胎児が突然これほど大量の血液を失った場合は、死産の可能性が非常に高くなります。したがって、この例では、死産の原因として FMH を疑う可能性が高くなります。ただし、このような診断はまだ完全に決定的ではないことに注意することが重要です。長期間にわたって大量の血液を失っている胎児は、この遅い失血を補うことができます。KB 染色では、FMH の深刻さのレベルについては何も教えてくれないからです。つまり、陽性の KB 染色と高い値と死産を完全に相関させることはできませんが、多くの場合、既知の妊娠の遺伝性合併症などの他の情報を考慮すると、FMH と死産の間には非常に高い正の相関係数が観察されています。 PFB≥20{\displaystyle PFB\geq 20}PFB{\displaystyle PFB}r≈+1.000{\displaystyle r\approx +1.000}

胎児赤血球検出の問題

胎児と母親の血液細胞は母親の血流中で同じ寿命を持つため、死産後はかなりの期間、KB染色から有益な結果を得ることができます。しかし、母親と胎児のABO不適合の場合、胎児赤血球は母親の血流から急速に排除されるため、KB染色ではFMHの程度（もしあれば）を過小評価するため、死産後すぐにKB染色を行うことがさらに重要です。文献では、出産後にサンプルを採取した場合の偽陽性について多くの懸念が提起されています。一般的に、これは問題ではありません。出産により微小出血の検出頻度が高くなりますが、これによってFMHが死産の原因である可能性があるという解釈が混乱することはありません。一部の文献で主張されているにもかかわらず、誘発、陣痛開始、出産、胎盤娩出前などにサンプルを採取する必要はありません。ただし、帝王切開を行う場合、その前にサンプルを採取しないと、偽陽性率が 2% になります。

最後に、胎児ヘモグロビンが母体血球中に残存する原因となるものは、解釈を非常に困難にします。鎌状赤血球症をはじめとする特定の異常ヘモグロビン症は、この原因となります。全体として、約1～3%の確率で、誤った解釈につながる可能性があります。

母体外傷のすべての症例

2004年に発表された論文では、臨床評価だけでは早産リスクの判定に十分な感度が得られないため、すべての母体外傷症例においてクライハウアー・ベトケ（KB）検査が必要であると結論付けられました。KB検査は母体外傷後の早産リスクを正確に予測しますが、その論文では臨床評価では予測できないと結論付けられています。KB検査が陰性であれば、外傷後の電子胎児モニタリングの期間は安全に短縮できます。KB検査が陽性であれば、早産リスクが著しく高いため、詳細なモニタリングが必須となります。KB検査は、Rh型に関わらず、すべての母体外傷患者にとって重要な利点があります。[ 8 ]

参照

参考文献

  1. ^ a b Katiyar R, Kriplani A, Agarwal N, Bhatla N, Kabra M (2007). 「Kleihauer–Betke試験による絨毛膜絨毛採取後の胎児母体出血の検出と母体血清α-フェトプロテイン濃度の上昇」Prenat . Diagn . 27 (2): 139– 42. doi : 10.1002/pd.1632 . PMID  17191260. S2CID  36617092 .
  2. ^ a b c d Kim YA, Makar RS (2012年4月). 「胎児母体出血の検出」 . American Journal of Hematology . 87 (4): 417–23 . doi : 10.1002/ajh.22255 . PMID 22231030. S2CID 43712143 .  
  3. ^クライハウアー、エンノ;ブラウン、ヒルデガルト。クラウス・ベトケ (1957)。 「赤血球の胎児ヘモグロビンのデモンストレーション」。Klinische Wochenschrift (ドイツ語)。35 (12): 637–638。土井: 10.1007/BF01481043。
  4. ^アルコール性ヘマトキシリン、酸性塩化第二鉄、シェパード染色液。シェパード染色液／希釈液
  5. ^ Kleihauer, E (1974年2月). 「胎児ヘモグロビンの測定：溶出法」. CRC Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences 5 ( 1974年2月): 50–52 . doi : 10.3109/10408367409107625 .
  6. ^ Schneider, J (1963). 「母体循環系を循環する胎児赤血球の最小数を定量的に測定するための新しい計数法」Klin. Wochenschr . 41 : 563–5 . doi : 10.1007/BF01482399 . PMID 13992143. S2CID 24224188 .  
  7. ^ a b c Diann M. Krywko; Sara M. Shunkwiler (2022). Kleihauer Betke Test . フロリダ州トレジャーアイランド: StatPearls. PMID 28613626 – StatPearls,国立生物工学情報センター経由. 最終更新日: 2020年1月20日。
  8. ^ Muench, Michael V. (2004). 「Kleihauer-Betkeテストはすべての母体外傷症例において重要である」. Journal of Trauma and Acute Care Surgery . 57 (5): 1094– 1098. doi : 10.1097/01.TA.0000096654.37009.B7 . PMID 15580038 . 
  • [1]クライハウアーテスト
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