比較ゲノムハイブリダイゼーション

比較ゲノムハイブリダイゼーション（CGH）は、細胞を培養する必要なく、検査サンプルと参照サンプルのDNAの倍数性レベルに関連するコピー数変異（CNV）を分析する分子細胞遺伝学的手法である。この手法の目的は、2つのソース（ほとんどの場合、密接に関連している）に由来する2つのゲノムDNAサンプルを、染色体全体または染色体下領域（染色体全体の一部）の増加または減少に関して差異が含まれていると疑われるため、迅速かつ効率的に比較することである。この手法は、もともと固形腫瘍と正常組織の染色体相同体間の差異を評価するために開発されたものであり、[ 1 ]ギムザ染色法や蛍光in situハイブリダイゼーション（FISH）などの従来の細胞遺伝学的分析手法と比較して、5～10メガベースという優れた解像度を備えている。これらの手法は、使用する顕微鏡の解像度によって制限される。[ 2 ] [ 3 ]

これは、競合的蛍光 in situ ハイブリダイゼーションを用いることで実現されます。簡単に言うと、比較対象となる 2 つのソース（通常はテスト ソースとリファレンス ソース）から DNA を分離し、各DNAサンプルを異なる色（通常は赤と緑）の蛍光体（蛍光分子）で個別に標識し、 DNA を変性させて一本鎖にした後、得られた 2 つのサンプルを通常の中期染色体スプレッドに 1:1 の比率でハイブリダイズさせます。標識された DNA サンプルは、それぞれの起源部位でこの中期染色体スプレッドに結合します。蛍光顕微鏡とコンピュータ ソフトウェアを用いて、異なる色の蛍光信号を各染色体の長さに沿って比較し、2 つのソース間の染色体の違いを識別します。染色体の特定領域におけるテスト サンプルの色の強度が高い場合、対応するソース サンプルでその領域の物質が増加していることを示し、リファレンス サンプルの色の強度が高い場合、テスト サンプルのその特定の領域の物質が減少していることを示します。中性色（蛍光標識が赤と緑の場合は黄色）は、その位置の2つのサンプル間に違いがないことを示します。[ 2 ] [ 3 ]

CGHは不均衡な染色体異常のみを検出できます。これは、相互転座、逆位、環状染色体といった均衡な染色体異常はコピー数に影響を与えないためであり、CGH技術はコピー数を検出します。しかし、CGHは1回の検査でヒト全46染色体を検査し、顕微鏡レベルでも欠失や重複を発見できるため、他の細胞学的手法によるさらなる研究の対象となる候補遺伝子の特定につながる可能性があります。[ 2 ]

DNAマイクロアレイをCGH技術と組み合わせて使用​​することで、より特異的なアレイCGH（aCGH）が開発され、100キロベースという高解像度でCNVを遺伝子座ごとに測定できるようになりました。[ 4 ] [ 5 ]この改良された技術により、既知および未知の疾患の病因を発見することができます。

歴史

CGH開発の動機は、当時利用可能な細胞遺伝学的分析法（ギムザ染色法とFISH法）の解像度が、結果の解釈に必要な顕微鏡の性能によって制限されていたという事実に端を発しています。さらに、ギムザ染色法の 解釈は曖昧になる可能性があり、信頼性を低下させていました。また、どちらの手法も多大な労力を必要とするため、検査対象となる遺伝子座が限られていました。[ 4 ]

CGH解析の最初の報告は、1992年にカリフォルニア大学サンフランシスコ校のカリオニエミらによってなされました。彼らはCGHを固形腫瘍の解析に利用しました。彼らは、乳がん細胞株と原発性膀胱腫瘍の両方にこの技術を直接適用し、細胞の完全コピー数核型を確立することで、この成果を達成しました。彼らは16の異なる増幅領域を特定することができ、その多くは新たな発見でした。[ 1 ]

その後まもなく、1993年にデュ・マノワールらは実質的に同様の手法を報告した。著者らは、 DNAライブラリーから採取した一連のヒト染色体を、2種類の蛍光色素を異なる割合で染色してこの手法を検証した。また、ダウン症候群またはT細胞性前リンパ球性白血病の患者のゲノムDNA、および腎乳頭癌細胞株の細胞にもCGHを適用した。得られた蛍光比は正確であり、異なる細胞種のゲノムDNA間の差異を検出可能であり、したがってCGHは非常に有用な細胞遺伝学的解析ツールであると結論付けられた。[ 6 ]

当初、CGH技術の普及は困難でした。プロトコルが統一されておらず、特にデータの解釈における不確実性により矛盾が生じていたためです。[ 3 ]しかし、1994年に分かりやすいプロトコルを詳細に説明したレビューが発表され[ 7 ]、画像解析ソフトウェアが市販されたことで、CGHは世界中で利用できるようになりました。[ 3 ]マイクロダイセクションや縮重オリゴヌクレオチドプライムポリメラーゼ連鎖反応（DOP-PCR） などの新しい技術がDNA産物の生成に利用できるようになると、CGHの概念をより小さな染色体異常に適用できるようになり、CGHの解像度が向上しました。[ 3 ]

従来の中期染色体調製の代わりにDNAマイクロアレイを使用するアレイCGHの実装は、 1997年にSolinas-Tolodoらによって腫瘍細胞を使用して[ 8 ]、1998年にPinkelらによって乳がん細胞を使用して初めて実施されました。[ 9 ]これは、ヒトゲノムプロジェクトによって可能になりました。このプロジェクトでは、ヒトゲノム全体の位置がわかっているクローン化されたDNA断片のライブラリが生成され、これらの断片がDNAマイクロアレイ上のプローブとして使用されます。 [ 10 ]現在では、cDNA、ゲノムPCR産物、細菌人工染色体（BAC）などのさまざまな起源のプローブを、最大200万のプローブを含めることができるDNAマイクロアレイで使用できます。[ 10 ]アレイCGHは自動化されており、プローブがメタフェーズ標本よりもはるかに小さいため、従来のCGHよりも高い解像度（100 kbまで）が可能で、必要なDNA量も少なく、必要に応じて特定の染色体領域をターゲットにすることができ、順序付けられているため分析が速く、診断用途に非常に適応性があります。[ 10 ] [ 11 ]

図1. CGHプロトコルの概略図

基本的な方法

メタフェーズスライドの準備

スライド上のDNAは参照サンプルであり、核型が正常な男性または女性から採取されますが、男性のY染色体よりもはるかに多くの遺伝情報を含む2つのX染色体を持つ女性のDNAを使用することが好ましいです。フィトヘマグルチニン刺激末梢血リンパ球を使用します。ヘパリン処理血液1mLを培養液10mLに加え、5% CO2雰囲気下で37℃で72時間培養します。コルヒチンを添加して細胞の有糸分裂を停止させ、細胞を回収して低張塩化カリウムで処理し、3:1メタノール/酢酸で固定します。[ 3 ]

次に、細胞懸濁液を1滴、エタノールで洗浄したスライドガラスに約30cmの距離から滴下します。この操作は室温で湿度60～70%の条件下で行うのが最適です。スライドガラスは位相差顕微鏡を用いて観察し、細胞質が最小限であること、染色体が重なっていないこと、染色分体が分離していない400～550本のバンドが観察され、最終的に光沢がなく暗く見えることが確認されます。スライドガラスは室温で一晩風乾させる必要があり、その後は4本ずつまとめて-20℃でシリカビーズまたは窒素ガスを用いて乾燥状態を維持して保管する必要があります。ハイブリダイゼーションは変動する可能性があるため、異なるドナーを用いて試験する必要があります。市販のスライドガラスも使用できますが、必ず事前に試験を行う必要があります。[ 3 ]

試験組織および参照組織からのDNAの分離

標準的なフェノール抽出法は、被検組織または対照組織（核型が正常な個体）からDNAを採取するために用いられます。この方法では、トリス-エチレンジアミン四酢酸とフェノールを等量ずつ、DNA水溶液と混合します 。その後、撹拌と遠心分離によってDNAを分離し、水層を除去してエーテルでさらに処理した後、エタノール沈殿によってDNAを濃縮します。[ 3 ]

市販のアフィニティーカラムをベースにしたDNA分離キットを使用して行うこともできる。[ 3 ]

最高品質のDNAは新鮮な組織または凍結組織から抽出するのが望ましいが、適切な手順に従えば、ホルマリン固定またはパラフィンワックスで包埋されたアーカイブ材料を使用することもできる。CGH実験には0.5～1μgのDNAで十分だが、必要な量が得られない場合はDOP-PCRでDNAを増幅することができる。ただし、この場合は信頼性を高めるために、テストDNAサンプルと参照DNAサンプルの両方にDOP-PCRを適用することが重要です。[ 3 ]

DNA標識

ニックトランスレーションはDNAの標識に用いられ、DNAを切断し、蛍光色素で標識されたヌクレオチド（直接標識）またはビオチンまたはオキシゲニンで標識されたヌクレオチドを置換し、後から蛍光色素標識抗体を添加する（間接標識）。その後、ゲル電気泳動によって被検DNAと参照DNAの両方の断片長を確認することが重要である。最適なハイブリダイゼーションを得るには、断片長が500kb～1500kbの範囲内にある必要がある。[ 3 ]

ブロッキング

ライフテクノロジーズ社の無標識Cot-1 DNA（長さ50bp-100bpの反復配列を豊富に含む胎盤DNA）を添加することで、特にセントロメアとテロメアにおける正常な反復DNA配列をブロックします。これらの配列が検出されると、蛍光比が低下し、検出を逃れる増幅または損失が発生する可能性があるためです。[ 3 ]

交配

標識試験DNAと標識参照DNAをそれぞれ8～12μlずつ混合し、Cot-1 DNA 40μgを加えて沈殿させ、その後、DNA融解温度を下げるために50%ホルムアミド、有効プローブ濃度を高めるために10%デキストラン硫酸を含むハイブリダイゼーションミックス6μlに溶解し、pH7.0のクエン酸ナトリウム（SSC）溶液とする。[ 3 ]

スライドとプローブの変性は別々に行う。スライドは70%ホルムアミド/2xSSCに72℃で5～10分間浸漬し、プローブは80℃のウォーターバスに10分間浸漬して変性させ、すぐにメタフェーズスライド標本に加える。この反応液はカバーガラスで覆い、40℃の湿潤チャンバー内で2～4日間放置する。[ 3 ]

カバーガラスを取り除き、室温で2xSSCで3回、45℃で0.1xSSCで1回、室温でTNTで1回、計5分間洗浄する。反応液を10分間プレインキュベートした後、37℃で60分間インキュベートし、さらにTNTで5分間洗浄を3回、室温で2xSSCで1回洗浄する。スライドを70%/96%/100%エタノール溶液で乾燥させ、染色体同定のためにDAPI (0.35 μg/ml) で対比染色し、カバーガラスで封入する。[ 3 ]

蛍光可視化とイメージング

観察には、 DAPI染色と2種類の蛍光色素分子に適したフィルターを備えた蛍光顕微鏡が必要です。これらのフィルターは、狭帯域通過フィルターなど、蛍光色素分子間のクロストークを最小限に抑えるものでなければなりません。顕微鏡は、色収差のない均一な照明を提供し、適切に調整され、 63倍または100倍の倍率が得られるアポクロマート対物レンズ（プラン型）を備えている必要があります。 [ 3 ]

画像は、試料レベルで少なくとも0.1μmの空間分解能を持ち、少なくとも600×600ピクセルの画像が得られるカメラを用いて記録する必要がある。また、カメラは少なくとも5～10秒間画像を積分でき、最低8ビットの測光分解能を備えていなければならない。[ 3 ]

画像処理には専用のCGHソフトウェアが市販されており、バックグラウンドノイズの除去、染色体由来ではない物質の除去とセグメント化、蛍光比の正規化 、インタラクティブな核型解析、そして標準長への染色体スケーリングを行う必要がある。染色体の欠失または増幅領域を示す「相対コピー数核型」は、複数の高品質メタフェーズの比率を平均化し、それらをイデオグラム（バンドパターンに基づいて染色体を識別する図）に沿ってプロットすることによって生成される。比率プロファイルの解釈は、固定閾値または統計的閾値（信頼区間）を用いて行われる。信頼区間を用いる場合、蛍光比の95%が1.0を含まない場合に、増幅または減少が特定される。[ 3 ]

追加メモ

DNAに関わるあらゆるステップ、特に検査用DNAの混入を避けるよう細心の注意を払う必要があります。検体が正常なDNAで汚染されると、結果が1.0に近づき、異常が検出されない可能性があります。結果を確認するために、FISH、PCR 、フローサイトメトリーなどの実験が用いられる場合があります。[ 4 ] [ 12 ]

アレイ比較ゲノムハイブリダイゼーション

アレイ比較ゲノムハイブリダイゼーション（マイクロアレイベースの比較ゲノムハイブリダイゼーション、マトリックスCGH、アレイCGH、aCGHとも呼ばれる）は、ゲノム全体にわたる高解像度のスケールで染色体コピー数の変化を検出するための分子細胞遺伝学的手法です。 [ 13 ]アレイCGHは、従来のCGHと同じ競合的蛍光in situハイブリダイゼーションの原理を利用して、患者のゲノムを参照ゲノムと比較し、2つのゲノムの違いを特定し、患者のゲノム不均衡領域を特定します。

アレイCGHの導入により、従来のCGHの主な限界である解像度の低さが克服されました。アレイCGHでは、メタフェーズ染色体を、正確な染色体位置が既知のクローンDNA断片（+100～200 kb）に置き換えます。これにより、異常をより詳細に検出できるようになり、さらに、変化をゲノム配列に直接マッピングすることが可能になります。[ 14 ]

アレイCGHは、DNAコピー数変化の解析に使用される他の方法と比較して、特異的で感度が高く、高速でハイスループットな技術であることが証明されており、診断用途により適しています。この方法を用いると、 DNA配列の5～10キロベースレベルでのコピー数変化を検出できます。[ 15 ] 2006年現在、高解像度CGH（HR-CGH ）アレイでも、 200bpの解像度で構造変異（SV）を正確に検出できます。 [ 16 ]この方法により、がんや染色体異常による先天性欠損などのヒトの疾患における微小欠失や重複などの新たな反復性染色体変化を特定できます。

図2. アレイCGHプロトコル

方法論

アレイCGHは従来のCGHと同じ原理に基づいています。どちらの手法でも、参照（またはコントロール）サンプルのDNAと検査（または患者）サンプルのDNAは、2つの異なる蛍光色素で異なる標識が付けられ、プローブとして用いられます。これらのプローブは、核酸標的 に競合的にハイブリダイズします。従来のCGHでは、標的は参照メタフェーズスプレッドです。アレイCGHでは、これらの標的は、様々なベクター（BACやプラスミドなど）、cDNA、またはオリゴヌクレオチドにクローニングされたゲノム断片です。[ 17 ]

図 2. [ 14 ]はアレイ CGH 技術の概略図である。検査対象サンプルの DNA は赤色蛍光体 (シアニン5) で標識され、参照 DNA サンプルは緑色蛍光体 (シアニン 3) で標識される。2 つの DNA サンプルを等量混合し、数千個の均等間隔で配置されたクローン DNA 断片またはオリゴヌクレオチドの DNA マイクロアレイに共ハイブリダイゼーションする。これらのクローン DNA 断片またはオリゴヌクレオチドはアレイ上に 3 連でスポットされている。ハイブリダイゼーション後、デジタル画像化システムを使用して、ハイブリダイズした各蛍光体の相対的な蛍光強度を捕捉し定量化する。[ 17 ]得られた蛍光強度の比は、検査ゲノムと参照ゲノムの DNA 配列のコピー数の比に比例する。1 つのプローブ上の蛍光色素の強度が等しい場合、患者のゲノムのこの領域には検査サンプルと参照サンプルの DNA が等量含まれていると解釈される。 Cy3:Cy5比が変化している場合、これは特定のゲノム領域における患者のDNAの損失または増加を示しています。[ 18 ]

アレイCGHへの技術的アプローチ

IMR32神経芽腫細胞株のACGHプロファイル

アレイ CGH は、さまざまな技術を使用して実装されています。したがって、アレイ CGH の利点と制限の一部は、選択した技術に依存します。初期のアプローチでは、BACなどの大きなインサートゲノム DNA クローンから作成されたアレイが使用されました。BAC を使用すると、単一コピーの変化を検出し、異常境界を正確に特定するのに十分な強度のシグナルが得られます。ただし、分離された BAC クローンの最初の DNA 収量が低いため、DNA 増幅技術が必要になります。これらの技術には、ライゲーション介在ポリメラーゼ連鎖反応 (PCR)、1 つまたは複数のプライマーセットを使用する縮重プライマー PCR、およびローリングサークル増幅が含まれます。[ 19 ] cDNA を使用してアレイを構築することもできます。これらのアレイは現在、高い空間解像度を生み出しますが、cDNA の数は染色体上にコードされている遺伝子によって制限され、クロスハイブリダイゼーションのために感度が低くなります。[ 14 ]この結果、ゲノム全体で単一コピーの変化を検出することができなくなります。[ 20 ]最新のアプローチは、短いオリゴヌクレオチドを用いてアレイをスポットする方法です。オリゴヌクレオチドの量はほぼ無限であり、処理は迅速、費用対効果が高く、容易です。オリゴヌクレオチドは単一コピーの変化を検出する感度を持っていませんが、染色体上で隣接してマッピングされるオリゴヌクレオチドの比率を平均化することで、感度の低下を補うことができます。[ 21 ]また、特定のブレークポイントを検出するために、重複したプローブを持つアレイを使用することも可能です。

設計アプローチ

CGH アプリケーション用のマイクロアレイの設計には、全ゲノムとターゲットの 2 つのアプローチがあります。

全ゲノムアレイは、ヒトゲノム全体をカバーするように設計されています。これらのアレイには、ゲノム全体を広範囲にカバーするクローンと、ゲノムの範囲内で連続的にカバーするアレイが含まれることがよくあります。全ゲノムアレイは主に研究用途のために構築されており、遺伝子発見において優れた価値を実証しています。また、これまでにない解像度でゲノム中のDNAの増減をスクリーニングする上でも非常に有用です。[ 17 ]

ターゲットアレイは、ゲノムの特定の領域を対象とし、その標的領域を評価するために設計されます。特定の染色体または染色体セグメントを研究するために、あるいは微小欠失症候群またはサブテロメア再構成が疑われる個人における特定のDNA量異常を同定・評価するために設計される場合があります。医療現場におけるターゲットマイクロアレイの重要な目標は、不均衡な細胞遺伝学的異常の診断、遺伝カウンセリング、予後、および臨床管理に臨床的に有用な結果を提供することです。[ 17 ]

アプリケーション

従来の

従来のCGHは、腫瘍において反復的に欠損または増加する染色体領域の同定、ならびに癌の診断および予後予測に主に用いられてきた。[ 22 ]このアプローチは、胎児および新生児ゲノムにおける染色体異常の研究にも用いることができる。さらに、従来のCGHは染色体異常の検出にも用いることができ、ヒトの遺伝性疾患に関連する複雑な異常の診断にも有効であることが示されている。[ 14 ]

がん研究において

同じ腫瘍型を対象とした複数の研究から得られた CGH データは、非ランダムな遺伝子異常の一貫したパターンを示している。[ 23 ]これらの変化の一部はさまざまな種類の悪性腫瘍に共通しているようですが、その他はより腫瘍に特異的です。たとえば、染色体領域 1q、3q、8q の増加、および 8p、13q、16q、17p の減少は、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、腎臓がん、膀胱がんなど、多くの腫瘍型に共通しています (図 3)。精巣がんにおける 12p および Xp の増加、膀胱がんにおける 13q の増加と 9q の減少、腎臓がんにおける 14q の減少、卵巣がんにおける Xp の減少などの他の変化はより特異的であり、さまざまな臓器でのがん発生中に作用する固有の選択力を反映している可能性があります。[ 23 ]アレイCGHは、慢性リンパ性白血病などのB細胞悪性腫瘍の研究や診断にも頻繁に使用されています。

染色体異常

猫鳴き（CdC）は、5番染色体短腕の部分的な欠失によって引き起こされる症候群です。[ 24 ]いくつかの研究により、従来のCGHは、この欠失だけでなく、より複雑な染色体異常の検出にも適していることが示されています。例えば、Levyら（2002）は、CdCの特徴である猫のような鳴き声を示すものの、核型が不明瞭な乳児を報告しました。CGH分析により、5p15.3からの染色体物質の喪失が明らかになり、臨床的に診断が確定しました。これらの結果は、従来のCGHが構造異常の検出において信頼性の高い技術であり、特定の症例では複雑な異常の診断においてより効率的である可能性があることを示しています。[ 24 ]

アレイCGH

アレイCGHの応用は主に癌におけるゲノム異常の検出を目的としています。しかし、アレイCGHはヒトの遺伝性疾患を引き起こすDNAコピー数異常の解析にも適しています。[ 14 ]つまり、アレイCGHは欠失、増幅、切断点、倍数性異常を発見するために用いられます。早期診断は患者にとって有益であり、適切な治療とカウンセリングを受けることで予後を改善できます。[ 10 ]

がんにおけるゲノム異常

がんでは遺伝子変異や遺伝子再編成が頻繁に発生し、その病因に寄与しています。アレイCGHによるこれらの異常の検出は、重要ながん遺伝子の位置に関する情報を提供し、診断、がんの分類、予後予測において臨床的に有用です。[ 17 ]しかし、免疫グロブリンサブ遺伝子の再編成中に一部のDNA物質が生理的に失われるため、遺伝物質の損失のすべてが病因となるわけではありません。最近の研究では、アレイCGHを用いていくつかの乳がんマウスモデルにおける染色体異常（コピー数変異）領域を特定し、myc誘導性腫瘍形成に関与する遺伝子の特定に成功しました。[ 25 ]

アレイCGHは、癌における染色体異常の発見だけでなく、腫瘍の進行モニタリングにも応用できます。アレイCGHで異常が同定されれば、FISH法を用いて転移病変と原発性病変、あるいは悪性度不明の腫瘍を鑑別することも可能です。[ 5 ] [ 10 ]

顕微鏡下異常

プラダー・ウィリー症候群（PWS）は15q11-13を含む父親の構造異常であり、同じ領域の母親の異常はアンジェルマン症候群（AS）を引き起こします。どちらの症候群でも、症例の大部分（75％）はPWS/AS重要領域の3～5 Mbの欠失の結果です。[ 26 ]これらの小さな異常は細胞遺伝学や従来のCGHでは検出できませんが、アレイCGHを使用すると簡単に検出できます。原理証明として、Vissersら（2003）は1 Mbの解像度を持つゲノムワイドアレイを構築し、PWS患者を含む、FISHで確認された既知の微小欠失症候群の患者3人をスクリーニングしました。3症例すべてで、1.5～2.9 Mbの異常が容易に特定されました。[ 27 ]このように、アレイCGHは超顕微鏡的異常を検出する特異的かつ感度の高いアプローチであることが実証されました。

オーバーラップマイクロアレイを使用すると、染色体異常に関係するブレークポイントを発見することも可能です。

出生前遺伝子診断

まだ広く普及している技術ではありませんが、着床前遺伝子スクリーニングのツールとしてのアレイCGHの利用は、ますます普及しつつあります。着床不全、流産、ダウン症候群（21トリソミー）などの疾患に寄与する可能性のある卵子、精子、または胚のCNVや異数性を検出できる可能性があります。そのため、アレイCGHは、人生を変えるような疾患の発生率を低減し、体外受精の成功率を向上させる有望なツールとなっています。この技術では、単一細胞から全ゲノム増幅を行い、これをアレイCGH法で使用します。また、均衡型相互転座やロバートソン転座などの染色体転座を持つカップルにも使用できる可能性があり、これらの転座は子孫に染色体の不均衡を引き起こす可能性があります。[ 12 ] [ 28 ] [ 29 ]

CGHとアレイCGHの限界

従来のCGHの主な欠点は、モザイク、均衡型染色体転座、逆位など、コピー数の変化を伴わない構造的染色体異常を検出できないことである。また、CGHは倍数性レベルに対する増加と減少しか検出できない。[ 30 ]さらに、短い反復DNA配列を含む染色体領域は個人間で大きく異なり、CGH分析を妨げる可能性がある。[ 14 ]そのため、セントロメアやテロメアなどの反復DNA領域は、標識されていない反復DNA（Cot1 DNAなど）でブロックするか、スクリーニングから省略するか、またはその両方を行う必要がある。[ 31 ]さらに、従来のCGHの解像度は、臨床応用を制限する大きな実際的問題である。 CGHは、ガンとヒトの遺伝性疾患の両方の研究と診断において有用かつ信頼性の高い技術であることが証明されているが、その応用は肉眼的な異常にのみ関係している。メタフェーズ染色体の解像度には限界があるため、従来のCGHでは5～10 Mb未満の異常は検出できない。[ 23 ] このような異常の検出には、高解像度の技術が必要である。アレイCGHはこれらの限界の多くを克服する。アレイCGHは高解像度を特徴とし、これが従来のCGHに対する最大の利点である。標準解像度は1～5 Mbだが、アレイにクローンを追加することで約40 kbまで上げることができる。しかし、従来のCGHと同様に、アレイCGHの主な欠点は、コピー数の変化をもたらさない異常を検出できないことと、モザイクを検出する能力が限られていることである。[ 14 ]検出できるモザイクのレベルは、クローンの感度と空間解像度に依存する。現在、約50%の細胞に存在する再編成が検出限界である。このような異常の検出には、SKY（スペクトル核型分析）やFISHなどの他の技術を使用する必要があります。[ 32 ]

参照

参考文献

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